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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 藥學 » 天然藥物化學 » 大孔樹脂純化黃酮含量的問題
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tz607222鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
大孔樹脂純化黃酮含量的問題 已有3人參與
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| 本人剛剛接觸天然藥物的分離純化，想用大孔樹脂最佳醇濃度洗下含量最高的黃酮那部分作為藥理模型的使用藥物。我將蕁麻浸膏用少量水超聲溶解后，配成6mg/ml的濃度上樣。開始水洗體積為7BV，上樣流速為4ml/ml，醇洗脫體積為5BV、洗脫流速4ml/min。收集純化后的流出液，經(jīng)濃縮、減壓干燥后，以紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量。問題來了！我水洗完后，以蘆丁味標準品，測定水洗部分的黃酮含量為2%，接著用15%乙醇繼續(xù)洗脫，測得這部分黃酮含量為31%；再用30%醇洗脫，含量為39.25%；50%乙醇洗脫，黃酮含量為30.52%。這個結果和我?guī)熃阕鲞^的50%醇洗脫的黃酮含量能達到52%完全版不相符啊，15%醇和30%醇洗的黃酮怎么比50%的還多的呢？？？這點哪位大神請給我解釋以下，是我?guī)熃愕慕Y果不對，還是我上柱子上的有問題呢？@lifeliuyan |
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 黃酮 |
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2樓2018-02-08 08:34:07
wang422jian
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3樓2018-02-09 08:07:19
tz607222
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什么意思？為什么加一塊？我得意思是想找出能洗出黃酮含量最高的那部分所對應的醇濃度，每個醇濃度洗下的部分旋蒸后測的這部分含量，得出的百分比。就是想得到百分比最高的那部分 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2018-02-11 19:27:32
czzlnkar
新蟲 (著名寫手)
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【答案】應助回帖
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問題出在幾個方面： 1是算錯了，比如定容的容量瓶記錯了或者吸光度記錯數(shù)了等等非操作手法問題……2是你師姐那部分提取不完全不知道回收率是不是已經(jīng)過了……3是你用的藥材和她的不是一批造成含量不同……4是本身此方法重現(xiàn)性差，過柱子的時候手法因人而異或乙醇沒被水洗干凈等等造成做定量本身就比較不易重現(xiàn) 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2018-02-11 23:02:04
6樓2018-02-12 09:22:48
tz607222
鐵蟲 (小有名氣)
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您說的過載問題我似懂非懂，如何判斷是否過載呢？如果過載會造成什么樣的數(shù)據(jù)影響呢？請指教。我還發(fā)現(xiàn)用水洗下來的東西顏色和膏基本是一樣的，這是不是說明了有一部分浸膏沒有吸附就被直接沖下來了呢？或許是否跟我上樣之后關閉下端閥門靜置了20分鐘就用水洗有關呢？是否應該打開閥門讓它以最慢的速度走，不能關閉靜置？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2018-02-18 00:25:08
8樓2018-03-13 16:11:32
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【答案】應助回帖
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1.首先你的藥材如果和你師姐的不一樣，那么結果不具有可比性。 2.從你回復其他人的內容可以看出你的柱子可能過載了。 3.有人說你的黃銅量超過100%，那是他們理解錯了。你說的應該是每個梯度溶劑洗脫物中黃銅的占比，這個占比是可以在0-100%（當然很難達到哈哈）的。 4.你最好重復做一次，洗脫之前，充分吸附（大孔樹脂一般不會死吸附），然后梯度洗脫（也不要按多少倍柱體積了），直接洗到洗脫液為無色時，換用下一個梯度洗脫。然后收集每個梯度洗脫液，旋干，制備成粉末后測量黃銅含量，或者濃縮成浸膏（不建議，浸膏水分無能統(tǒng)一，換算不便），或者濃縮后溶于測量時所用的溶液（稀釋后測量，結果須歸一到每個梯度洗脫物中黃酮的量占原藥材中黃酮總量的百分比，這里面所有梯度計算的總和是不能大于100%的）。祝你好運。 |
9樓2018-03-14 17:05:05
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