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[求助]
GE的16/600 75pg的柱子 壓力升高 已有2人參與
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| 我有一根GE的16/600 75pg的柱子，柱體積120ml, 跑了3個(gè)樣品后，樣品buffer為（100mM Nacl, 10mM 磷酸鈉）。 之后用水沖洗，開(kāi)始流速0.5ml/min，柱壓0.18Mpa。 走到350ml的時(shí)候，柱壓升高到0.28Mpa。 是怎么回事呢？換成水后，柱壓怎么在一直升高。柱子是新的，才跑了3個(gè)樣。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
| 壓力升高一般是有蛋白在柱上沉淀了，NaOH清一下柱子，注意控制壓力，尤其ΔP別超。如果系統(tǒng)壓大，而ΔP正常的話，那么就是系統(tǒng)堵了，一般是在線濾器堵了，拆下來(lái)超聲一下就好了。如果ΔP壓力大就清柱吧，可能清柱過(guò)程中壓力會(huì)越來(lái)越大，注意控制，清完就正常了。以后用柱子前，先確認(rèn)你的蛋白在過(guò)柱的這個(gè)buffer里穩(wěn)不穩(wěn)定，不穩(wěn)定就換個(gè)buffer，不然蛋白容易部分或全部在柱上沉淀。我們實(shí)驗(yàn)室總有人圖便捷，不管什么蛋白就喜歡用一個(gè)buffer過(guò)柱子，然后柱子壓力經(jīng)常往上升，這個(gè)習(xí)慣很不好。 |
5樓2018-02-24 17:00:05
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【答案】應(yīng)助回帖
| 一定的體積流速對(duì)應(yīng)一定的壓力，增大流速壓力升高，這是必然現(xiàn)象。首先你用完柱子后是需要對(duì)柱子按照清洗再生的操作方法，洗掉柱子上的非特異性吸附物質(zhì)，防止柱子填料因?yàn)闅埩魳悠返脑蚍磯涸龃�，也便于下次使用，延長(zhǎng)柱子壽命，再就是要清洗AKTA等純化系統(tǒng)的管路。至于用水走，壓力升高到0.28Mpa，請(qǐng)問(wèn)對(duì)應(yīng)的體積流速是多少呢？增大體積流速，壓力升高也是正常的。AKTA用純水和0.1M NaCl走柱子（測(cè)新填料強(qiáng)度及流速和耐壓）在增大體積流速時(shí)壓力也是會(huì)增大的最大可到0.4Mpa，對(duì)應(yīng)的流速會(huì)在25ml/min左右。希望對(duì)你有所幫助。 |
4樓2018-02-24 09:21:20
dlzhkkk
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在界面上有。那么就不是蛋白沉淀了，而是RNA的問(wèn)題了，我以前做蛋白和RNA的相互作用，也有碰到過(guò)壓力升高問(wèn)題，友情提醒一下，過(guò)RNA前務(wù)必每次都要用NaOH處理柱子，不然RNA必然會(huì)在柱上殘留(可能是非特異離子吸附)，然后污染下個(gè)樣品，別問(wèn)我怎么知道的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
8樓2018-03-02 20:06:52
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您碰到問(wèn)題是怎么解決的呢，用NaOH洗嗎？濃度是多少呀，洗多少個(gè)柱體積�。亢糜魫灠�，就跑了三個(gè)樣，柱子就這樣了。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
9樓2018-03-04 14:15:40
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清洗看說(shuō)明書(shū)，你都沒(méi)寫(xiě)清楚用的什么柱子，分子篩一般0.5M，我一般沖1CV，換水換buffer，如果堵得嚴(yán)重可以多沖幾個(gè)CV。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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半點(diǎn)心10樓2018-03-04 22:01:50
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