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plwwgk新蟲 (小有名氣)
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[求助]
一個關(guān)于報(bào)告基因的問題 已有1人參與
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最近在寫標(biāo)書，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上有點(diǎn)小問題，請求大家?guī)兔獯�，我想看一個蛋白在缺氧條件下的表達(dá)情況，如果轉(zhuǎn)染這個蛋白-gfp質(zhì)粒，可以在熒光顯微鏡下實(shí)時觀察熒光強(qiáng)度，初步確定缺氧對他的影響嗎？還有我想采用共培養(yǎng)的體系，如果這個蛋白升高，他會提高vegf的表達(dá)，那么我可以用transwell板培養(yǎng)兩種細(xì)胞，上室放另一種細(xì)胞，轉(zhuǎn)vegf-gfp質(zhì)粒，然后看共培養(yǎng)時，vegf的熒光表達(dá)，確定下室缺氧，對上室vegf的表達(dá)熒光強(qiáng)度影響，這個辦法可以嗎 @biostar2009 @biostar2009 @youlinglyw @飛約瘋?cè)嗽?/u> 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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yudaoqian88
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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我不是專業(yè)的，隨便根據(jù)我的理解說點(diǎn)，對后面的vegf不了解，不懂. 我知道別人做蛋白方面的實(shí)驗(yàn)，有用western做的，看蛋白條帶大小混含量變化。當(dāng)然，前提是要有抗體。這個實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)該是沒有問題的，但我有兩個小疑問，不知道會不會是個問題。 蛋白和報(bào)告基因融合是可以看到熒光的，關(guān)鍵的一點(diǎn)是，如果缺氧處理后，原始蛋白含量是升高的，那么似乎對你這個帶標(biāo)簽的蛋白的含量不會有影響，也就看不出亮度差別，這個時候就需要考慮把啟動子掛報(bào)告基因啦。如果是降低的，倒是會講降解你的原始蛋白和融合蛋白，導(dǎo)致熒光減弱。 還要考慮蛋白降解是從那一端，會不會帶標(biāo)簽以后影響他的程序化降解呢，是不是需要考慮也掛報(bào)告基因到前端。我猜的，不知道對不對，關(guān)鍵看別人是否這么干過吧。 有啥方法我也想看看，希望對你有幫助。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2018-03-04 01:29:02
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