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Xshin2829新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
往培養(yǎng)的細(xì)胞里加入GM132，想抑制蛋白降解，結(jié)果細(xì)胞為什么都死了?
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我想檢測(cè)兩個(gè)蛋白的互作，把兩種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)進(jìn)293T細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)其中一種蛋白對(duì)另一種蛋白有降解作用，于是在轉(zhuǎn)染之后加入蛋白酶體抑制劑MG132，按照說(shuō)明書(shū)上說(shuō)的，用DMSO溶解，所用濃度為18.5μmol。我先用DMSO溶解MG132，得到濃度為185μmol的溶液，然后5μl加到有495μl培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)孔中，這樣MG132的終濃度就是1.85μmol了，因?yàn)樵噭┎粔蛴�，我都這樣縮小10倍使用了，可是三小時(shí)后細(xì)胞全都死亡破碎了，我覺(jué)得可能是DMSO對(duì)細(xì)胞有毒害作用或是MG132的濃度太高了，又縮小了2倍使用，細(xì)胞還是死了，請(qǐng)問(wèn)我是不是哪里做錯(cuò)了，想不通啊，求助! 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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s272605623
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6
- 帖子: 10
- 在線(xiàn): 12.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2481203
- 注冊(cè): 2013-05-25
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 合成藥物化學(xué)
2樓2018-12-05 20:55:58
Xshin2829
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 19
- 帖子: 8
- 在線(xiàn): 37分鐘
- 蟲(chóng)號(hào): 10025798
- 注冊(cè): 2018-08-26
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
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作用時(shí)間太長(zhǎng)了細(xì)胞就會(huì)死掉的，一般就加6-8小時(shí)就可以收樣了。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
3樓2019-01-17 21:31:13
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