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小噬魅新蟲 (初入文壇)
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[求助]
知道基因CDS序列，怎么設(shè)計(jì)全長(zhǎng)引物擴(kuò)增全長(zhǎng)序列 已有3人參與
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有CDS序列，想得到全長(zhǎng)，怎么設(shè)計(jì)引物？該怎么做 @biostar2009 @youlinglyw @wizardfan @飛約瘋?cè)嗽?/u> 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2018-09-09 09:28:30
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3樓2018-09-09 09:30:14
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小噬魅(淵博震天代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2018-09-11 15:54:14
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小噬魅(淵博震天代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2018-09-11 15:54:14
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知道cDNA序列，也就是知道了ATG到終止子TAA或TAG或TGA的序列（真核），直接從兩頭數(shù)20幾個(gè)堿基好了，通過工具驗(yàn)證上下游引物的退火溫度差不多即可（55℃~65℃都行），只要PCR能P出目的帶就說明引物沒問題，有雜帶就膠回收，換句話說，引物設(shè)計(jì)不必太完美。 另外，如果知道兩端的UTR區(qū)，也完全可以在UTR區(qū)設(shè)計(jì)引物。PCR時(shí)以RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板（真核）。 |
4樓2018-09-11 09:55:12
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5樓2018-09-11 10:39:50
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6樓2018-09-11 14:57:39
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