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研究發(fā)現(xiàn) 新型疫苗有望治療小鼠模型的黑色素瘤 已有3人參與
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最近，研究人員開發(fā)了一款新型疫苗，這種疫苗與PD-L1抗體聯(lián)合在小鼠腫瘤模型上進(jìn)行試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不僅可以有效地對(duì)抗黑色素瘤，而且還能預(yù)防治療后的復(fù)發(fā)。建立黑素瘤動(dòng)物模型,可以用于抗黑素瘤藥物的療效評(píng)價(jià)，不少腫瘤模型公司提供小鼠黑色素瘤模型。 惡性黑色素瘤，簡(jiǎn)稱黑素瘤，由黑素母細(xì)胞轉(zhuǎn)變而來，是一種主要發(fā)生在皮膚的高度惡性腫瘤。約50%是由黑痣惡變所致，易轉(zhuǎn)移，也可原發(fā)于內(nèi)臟等處，其發(fā)病率約為0.0001%～0.009%，比皮膚癌少見，居皮膚惡性腫瘤第三位，但死亡率比皮膚癌高。黑素瘤也分早、中、晚期，其治療手段主要是進(jìn)行手術(shù)切除及淋巴清除，外加免疫治療、化療、放療等，早期預(yù)后良好。 1、黑色素瘤小鼠腫瘤模型的建立 通過皮下注射方式，將B16F10黑素瘤細(xì)胞接種于小鼠體內(nèi)，可以建立黑素瘤小鼠模型。美迪西根據(jù)客戶的需求提供各種有效的動(dòng)物模型，用來檢測(cè)藥物的有效性，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有非人類靈長動(dòng)物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、裸鼠等各種種類。目前，美迪西已經(jīng)建立多個(gè)有效動(dòng)物腫瘤模型，并經(jīng)過多方驗(yàn)證和長期實(shí)踐考驗(yàn)。 （1）黑色素瘤細(xì)胞接種 取20只小鼠，肩背部皮膚脫毛、消毒，皮下注射0.2mL B16F10單細(xì)胞懸液（1×106個(gè)/mL)，接種當(dāng)天計(jì)作D0，接種后第1～33天分別計(jì)作D1～D33。接種后小鼠按照體重隨機(jī)分為給藥組和對(duì)照組，每組10只。 （2）給藥 于D3、D6、D9和D12,給藥組皮下注射10mL/kgDTIC(5g/L)，對(duì)照組給以NS。 （3）觀察與記錄 每天觀察動(dòng)物一般狀況，于D11開始，測(cè)體重及游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤大小，每周3次，計(jì) 算腫瘤體積V=D×d2/2，其中D為腫瘤長徑，d為腫瘤短徑。 （4）實(shí)驗(yàn)終點(diǎn) 約于D20，對(duì)照組小鼠腫瘤體積大于3000mm3或瘤體表面出現(xiàn)潰爛，處死動(dòng)物，取瘤稱重。小鼠皮下黑色素瘤模型制作方法簡(jiǎn)單，比較接近臨床特征，具有很強(qiáng)的實(shí)用性。 2、治療黑色素瘤的藥物 黑色素瘤大多對(duì)化療藥物不敏感，常用藥物有DTIC、順鉑和長春新堿，而最常用的DTIC是一種生物合成的嘌呤類前體，進(jìn)入體內(nèi)后由肝微粒體去甲基形成單甲基化合物，具有直接細(xì)胞毒作用，主要作用G2期，抑制嘌呤、RNA和蛋白質(zhì)的生物合成也能影響DNA的合成。 研究人員在一種惡性黑色素瘤的小鼠模型中測(cè)試了三種不同的治療方案。所有的小鼠都接受了抗PD-L1抗體的癌癥免疫療法，但除此之外，它們還接受了不同的疫苗變體。研究團(tuán)隊(duì)將老鼠分成三組：一組皮下注射卵清蛋白，一組皮下注射卵清蛋白加上一種叫做Diprovocim的分子，第三組注射卵清蛋白和另一種佐劑明礬。 Diprovocim可以誘導(dǎo)人類和老鼠細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子（TNF & IL6），TNF的產(chǎn)生具有劑量依賴性。在人THP-1細(xì)胞和外周血單核細(xì)胞中，EC50分別達(dá)到110pM和875pM；在小鼠原發(fā)性腹腔巨噬細(xì)胞和骨源性DC細(xì)胞中，EC50分別達(dá)到1.3pM和6.7nM。 為了進(jìn)一步了解Diprovocim的作用機(jī)制，研究者通過分析C57BL/6J野生型和缺陷型小鼠中TLR的組分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Diprovocim靶向的是TLR1/TLR2,進(jìn)而激活下游的MAPK和NF-κB信號(hào)通路。研究人員發(fā)現(xiàn)，接種卵清蛋白加Diprovocim同時(shí)進(jìn)行抗PD-L1抗體治療的8只小鼠，在54天內(nèi)的存活率為100%。相比之下，接受免疫療法和卵清蛋白的嚙齒動(dòng)物卻沒有存活下來。那些接受抗PD-L1抗體和明礬的疫苗的人在同一時(shí)期內(nèi)的存活率是25%。 這種實(shí)驗(yàn)性疫苗還有另一個(gè)積極的作用，即保護(hù)身體免受腫瘤復(fù)發(fā)的困擾。就像疫苗可以訓(xùn)練身體抵抗外部病原體一樣，這種疫苗可以訓(xùn)練免疫系統(tǒng)去追蹤腫瘤�？茖W(xué)家們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)他們?cè)噲D在第二組實(shí)驗(yàn)組中重新引入黑素瘤的腫瘤時(shí)，發(fā)現(xiàn)是不可能的，因?yàn)檫@只動(dòng)物已經(jīng)接種了疫苗。當(dāng)他們?cè)趯?shí)驗(yàn)室進(jìn)行更多的實(shí)驗(yàn)時(shí)，研究人員能夠確定，Diprovocim能促進(jìn)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞，增強(qiáng)免疫反應(yīng)來攻擊和消除腫瘤細(xì)胞。 此外研究人員也注意到，疫苗和Diprovocim可以很容易地運(yùn)輸，這就不需要直接注射到一個(gè)主要的癌癥腫瘤部位才能發(fā)揮作用。相反，注射可以在肌內(nèi)進(jìn)行。在未來，研究人員希望繼續(xù)試驗(yàn)這種疫苗，并確認(rèn)在與其他類型的癌癥治療一起進(jìn)行時(shí)，這種疫苗是否有效。 |
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