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杜仲的蛋白純化及其藥理研究 已有1人參與
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杜仲是國(guó)內(nèi)特有的藥用物種，經(jīng)常作為臨床使用，一般都是使用皮入藥。對(duì)杜仲皮和杜仲膠顆粒中的蛋白進(jìn)行了分離和蛋白純化，為杜仲中的生物活性成分和藥理研究提供了手段。但是杜仲中的很多化合物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)特別相近，因此其有效成分的提取和分離存在一定困難。 蛋白表達(dá)純化是一項(xiàng)廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)、生命科學(xué)和醫(yī)藥等研究領(lǐng)域的技術(shù)，用于重組蛋白表達(dá)的宿主細(xì)胞通常來(lái)源于原核細(xì)胞、哺乳細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和酵母細(xì)胞等蛋白表達(dá)系統(tǒng)。美迪西提供蛋白表達(dá)服務(wù)，擁有多種蛋白表達(dá)系統(tǒng)，包括原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲(chóng)細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)（桿狀病毒）哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)，具備多種融合技術(shù)，可以為客戶在蛋白表達(dá)與純化方面提供多種選擇。從方案設(shè)計(jì)、基因優(yōu)化、表達(dá)條件優(yōu)化到純化的技術(shù)體系，以提高客戶的目的蛋白表達(dá)水平。 1、杜仲的蛋白分離研究 用凝膠層析、反相高效色譜層析等分離純化方法，從杜仲樹(shù)皮中分離到分子量為4.16的一個(gè)新杜仲抗真菌蛋白，并進(jìn)行了蛋白純化。 （1）用SDS-PAGE方法從杜仲膠顆粒中分離到分子量約為14、16、18、22、24、28、30、32和55 kDa的9個(gè)杜仲膠顆粒結(jié)合蛋白。用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)技術(shù)，鑒定了4.16、4.2、8.3、16和18 kDa蛋白序列，獲得14個(gè)肽片段。在抗菌肽數(shù)據(jù)庫(kù)(APD)中對(duì)這14個(gè)肽片段進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析、抗菌活性預(yù)測(cè)和序列比對(duì)，結(jié)果顯示有11個(gè)肽片段具有抗菌肽典型結(jié)構(gòu)。 （2）紙片法對(duì)EAFP3進(jìn)行體外抗菌活性檢測(cè)，抑菌活性檢測(cè)結(jié)果表明:EAFP3可抑制酵母、酵母類(lèi)真菌、霉菌和植物病原真菌的生長(zhǎng)，EAFP3對(duì)白色念珠球菌、黃曲霉、番茄灰霉病菌的IC_(50)值分別為31.25、31.25和62.5μg/mL。EAFP3對(duì)高溫有一定耐受性，在100℃加熱30 min仍有顯著抑制活性；可適應(yīng)較寬pH范圍，在pH從5.8-8.0范圍內(nèi)都有顯著抑制活性。該研究結(jié)果可能為創(chuàng)制新型生物農(nóng)藥和生物藥物提供了先導(dǎo)化合物信息，為克隆編碼杜仲抗菌蛋白的基因提供了引物和探針設(shè)計(jì)序列。 2、杜仲的藥理研究 （1）抗腫瘤作用 現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明杜仲有抗癌和抑癌之功效，其有效成分與其杜仲所含的木脂素、苯丙素及環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物有關(guān)。如研究者從杜仲葉氯仿提取物中分離出的地普黃酮，是一種干擾T淋巴細(xì)胞功能的免疫抑制物質(zhì)，對(duì)人鼻咽癌(KB)和鼠淋巴細(xì)胞白血病(P388)均有生長(zhǎng)抑制活性。杜仲具有興奮垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)、增強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)功能的作用。 （2）降壓作用 杜仲的降壓作用是經(jīng)過(guò)多年臨床證實(shí)的，現(xiàn)代藥理研究試驗(yàn)有效地揭示了這一作用的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)證明，杜仲水提物對(duì)犬有明顯的降壓作用，而且療效平穩(wěn)、無(wú)毒、無(wú)副作用。 （3）對(duì)免疫系統(tǒng)的影響 給小白鼠腹腔注射杜仲葉的20%和50%的乙醇提取物，可明顯增強(qiáng)小白鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能及腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，而對(duì)正常小鼠脾抗體形成細(xì)胞無(wú)明顯影響。熱水泡杜仲茶提取物用1%NaOH凍結(jié)，干燥后得到的堿性物質(zhì)為含糖醛酸的酸性多糖類(lèi)，該堿性物有抗破壞人體免疫系統(tǒng)病毒的功能，有可能用于預(yù)防和治療艾滋病。 （4）抗衰老作用 杜仲能增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫功能，對(duì)細(xì)胞免疫具有雙向調(diào)節(jié)作用，提示杜仲具有抗衰老作用。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，杜仲水提物能抑制乙二胺四乙酸、H2O2、維生素C等對(duì)脫氧核糖、DNA造成的氧化損傷。 （5）骨細(xì)胞增殖作用 杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR106成骨樣細(xì)胞體外共同培養(yǎng)，結(jié)果顯示，水提液具有最強(qiáng)的促進(jìn)細(xì)胞增殖作用，其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對(duì)細(xì)胞增殖有一定的促進(jìn)作用，而萃取后的剩余水層仍保留與原水層相似的促進(jìn)細(xì)胞增殖作用，表明杜仲中極性大的部分可能含有直接作用于成骨細(xì)胞的活性成分。 （6）其他作用 杜仲水煎劑對(duì)結(jié)核桿菌、福氏痢疾桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、炭疽桿菌有抑制作用。杜仲葉的各種麻醉犬均有利尿作用，且無(wú)快速耐受現(xiàn)象，對(duì)正常大鼠和小鼠也有利尿作用。杜仲的利尿作用與桃葉珊瑚甙有關(guān)，該成分能刺激副交感神經(jīng)中樞，加快尿酸轉(zhuǎn)移和排出，利尿作用明顯。此外杜仲還有利膽作用、降血脂作用、保胎作用、增強(qiáng)肌肉作用、中樞抑制作用等。 總之，杜仲具有廣泛的藥理作用，其應(yīng)用前景廣闊，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有巨大的潛力。 |
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