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南蛇藤提取物藥理作用及誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡研究
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南蛇藤是我國民間常用的一種植物藥，一些初步的藥理研究實(shí)驗(yàn)證實(shí)其中某些成分具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。如建立人胃癌裸鼠移植瘤模型可探討南蛇藤莖醋酸乙酯提取物(COE)對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901裸鼠移植瘤生長及凋亡的相關(guān)蛋白p53、Bcl-2、Bax表達(dá)的影響，一些生物醫(yī)藥公司提供蛋蛋白表達(dá)外包服務(wù)。 癌癥是困擾當(dāng)前醫(yī)學(xué)界的重點(diǎn)難題，其易反復(fù)、不易根除、對(duì)病患影響極大，一旦病癥爆發(fā)往往危及患者健康乃至生命。相關(guān)學(xué)者經(jīng)過醫(yī)學(xué)研究對(duì)于對(duì)于癌癥細(xì)胞與相關(guān)蛋白表達(dá)的關(guān)系有了更深層次的理解。想要徹底根除癌癥細(xì)胞，需要反復(fù)試驗(yàn)、多次臨床觀察，在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞生長及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的研究中，有研究人員會(huì)委托其他機(jī)構(gòu)進(jìn)行蛋白表達(dá)外包。 重組蛋白表達(dá)技術(shù)現(xiàn)已在生物學(xué)各個(gè)具體領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，尤其是蛋白質(zhì)的大規(guī)模生產(chǎn)和體內(nèi)功能研究都需要應(yīng)用重組蛋白表達(dá)載體。美迪西提供蛋白表達(dá)服務(wù)，其擁有多種蛋白表達(dá)系統(tǒng)，包括原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)（桿狀病毒）和哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)，具備多種融合技術(shù)，可以為客戶在蛋白表達(dá)與純化方面提供多種選擇。從方案設(shè)計(jì)、基因優(yōu)化、表達(dá)條件優(yōu)化到純化的技術(shù)體系，以提高目的蛋白表達(dá)水平。 p53基因是迄今發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因，其作為迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤發(fā)生相關(guān)性最高的抑癌基因，其研究進(jìn)展對(duì)于腫瘤的發(fā)生機(jī)制研究和臨床治療具有重要意義。BCL-2家族中的成員是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的重要因子，其中包括能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的Bax、BH3-only和能夠抑制凋亡的BCL-2三個(gè)蛋白亞家族。BAX在正常狀態(tài)下以單體形式存在，細(xì)胞凋亡時(shí)轉(zhuǎn)化為有活性的大分子量復(fù)合體。近年來研究表明與細(xì)胞增殖和癌變有關(guān)的癌基因 bcl-2參與了對(duì)細(xì)胞凋亡、增殖的調(diào)控。p53引起細(xì)胞發(fā)生凋亡的機(jī)制包括結(jié)合Bcl-2基因，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)從而誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡，也有研究稱p53的凋亡調(diào)解是通過上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl-2從而改變Bcl-xL/Bcl-xS實(shí)現(xiàn)的。 1、南蛇騰提取物的藥理研究 藥理研究表明南蛇騰具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗生育、昆蟲拒食及毒殺等活性。從滇南蛇藤種子中提出一種粗油，對(duì)大鼠有鎮(zhèn)靜及安定作用。用逆流分溶的方法進(jìn)一步提純后，得到Mal-Ⅲ，仍具有安定作用，但200毫克／公斤使貓流涎、腹瀉、震顫； 再進(jìn)一步提純后得Mal-ⅢA，對(duì)貓仍有安定作用，而無副作用；如于沸水浴中加熱4小時(shí)后，安定作用消失。將Mal-ⅢA混懸于吐溫80后，注射于狗、貓、猴，小鼠、大鼠腹腔，均有明顯的安定作用，并能增強(qiáng)環(huán)己巴比妥的作用，對(duì)小鼠具有降溫效力。本劑小劑量（70毫克／公斤）能對(duì)抗五甲烯四氮唑?qū)Υ笫蟮闹滤雷饔�，但加大劑量則增強(qiáng)其毒性。Mal-ⅢA尚能減少動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)，對(duì)麻醉貓，并有降壓作用，對(duì)大鼠有中等度利尿作用，對(duì)離體腸管有拮抗致痙劑作用。 滇南蛇藤種子的油亦具有解痙性質(zhì)，如對(duì)大鼠子宮等，并使血管收縮，但無抗菌活性；種子中提出的苦味樹脂，有降壓作用，小量使蛙心率減慢，大量使心臟停止于舒張期。 南蛇藤乙酸乙酯、正丁醇提取物具有抗腫瘤作用，在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時(shí)，對(duì)肝臟及免疫系統(tǒng)無明顯毒副作用，并可通過提高體內(nèi)抗氧化酶活性和自由基清除劑水平，保護(hù)機(jī)體免受氧自由基的攻擊，起到腫瘤防治作用；南蛇藤乙酸乙酯、正丁醇提取物對(duì)幽門螺桿菌有一定抑制作用。 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明乙酸乙酯提取物能增加細(xì)胞在t-BHP損傷下的存活率，提高細(xì)胞SOD、GSH-Px的活力，降低MDA含量。RT-PCR實(shí)驗(yàn)表明南蛇藤乙酸乙酯提取物能顯著下調(diào)衰老基因P16、P21和P53的表達(dá)。 2、南蛇藤提取物對(duì)人胃癌裸鼠移植瘤生長及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的研究 建立人胃癌裸鼠移植瘤模型，隨機(jī)分為模型組，COE低、中、高劑量(10、20、40 mg/kg)組和希羅達(dá)(267 mg/kg)組，每組7只，各組ig給藥，給藥3周后檢測(cè)裸鼠體質(zhì)量、腫瘤體積、瘤質(zhì)量等，繪制腫瘤生長曲線，并計(jì)算抑瘤率。應(yīng)用TUNEL法檢測(cè)COE處理后各組移植瘤組織中的細(xì)胞凋亡情況；免疫組織化學(xué)法和Western blotting技術(shù)分別檢測(cè)各組移植瘤組織和SGC-7901腫瘤細(xì)胞中p53、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)COE能夠較好地抑制胃癌裸鼠移植瘤的生長，能明顯縮小腫瘤體積，且呈劑量依賴性。COE低、中、高劑量組的抑瘤率分別為33.3%、46.8%、57.7%。TUNEL法顯示COE處理后腫瘤細(xì)胞凋亡較模型組明顯增多。免疫組化結(jié)果顯示COE處理后移植瘤組織中p53和Bax蛋白表達(dá)有升高的趨勢(shì)，而Bcl-2蛋白表達(dá)有降低的趨勢(shì)。其中與模型組相比，COE高劑量組中p53和Bax蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.001)，而Bcl-2蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.001)。Western blotting結(jié)果顯示與免疫組化有大致相同的變化趨勢(shì)。因此COE對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901裸鼠移植瘤具有明顯的抑制作用，其機(jī)制可能與上調(diào)p53和Bax的表達(dá)，下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡有關(guān)。 |
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