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蒿甲醚在SCID小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤治療上的研究
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蒿甲醚是一種廣泛用于瘧疾治療的中藥提取物，近年來發(fā)現(xiàn)蒿甲醚可以透過血腦屏障，同時具有抗腫瘤的作用。膠質(zhì)瘤是一種惡性度高、增殖旺盛、極易發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤。建立SCID小鼠人腦膠質(zhì)瘤原位模型，并觀察蒿甲醚在體內(nèi)對膠質(zhì)瘤的抑制及其抗血管生成的作用，為中草藥成分蒿甲醚在膠質(zhì)瘤的治療提供了研究基礎(chǔ)。 SCID小鼠即嚴重聯(lián)合免疫缺陷小鼠，是一種先天性T淋巴細胞和B淋巴細胞雙重免疫缺陷動物，它可以在一定程度上接受人以及其他動物的組織移植而成為嵌合體小鼠。它在移植人和其他動物的腫瘤后腫瘤成活率高，容易發(fā)生浸潤合和轉(zhuǎn)移。美迪西可以根據(jù)客戶的需求提供各種有效的動物模型，用來檢測藥物的有效性。實驗動物有非人類靈長動物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、裸鼠等各種種類。目前，已經(jīng)建立多個有效動物腫瘤模型，并經(jīng)過多方驗證和長期實踐考驗。 1、蒿甲醚在體外對U251人腦膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響, 將濃度為0、50、100、200、400、600及800μmol/L的蒿甲醚孵育U251膠質(zhì)瘤細胞24、48h，利用MTT法測定細胞增殖活性。然后將利用濃度為0、200、400及800μmol/L的蒿甲醚培養(yǎng)U251人膠質(zhì)瘤細胞48 h，利用Annexin V-FITC/PI法檢測細胞凋亡。最后利用Western blot法檢測膠質(zhì)瘤細胞的磷酸化AKt的表達水平。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)400μmol/L及更高濃度的蒿甲醚培養(yǎng)48 h，U251細胞的增殖活性受到顯著抑制，同時隨著濃度升高抑制作用增強。與對照組相比，蒿甲醚顯著促進U251細胞的凋亡。400μmol/L和800μmol/L濃度的蒿甲醚顯著抑制了磷酸化Akt的表達水平。因此蒿甲醚能夠以劑量依賴的方式顯著抑制U251細胞的增殖活性并促進其凋亡，該抑制作用可能與其抑制Akt信號通路有關(guān)。 2、蒿甲醚在SCID小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤治療上的研究 有研究者建立了SCID小鼠人腦膠質(zhì)瘤原位模型，觀察蒿甲醚在體內(nèi)對膠質(zhì)瘤的抑制及其抗血管生成的作用，探討蒿甲醚抑制膠質(zhì)瘤增殖的機制，為膠質(zhì)瘤的臨床治療提供一種新的思路和方法。 體外細胞基中培養(yǎng)人腦U251膠質(zhì)瘤細胞 采用MTT(四甲基偶氮唑藍)法測定蒿甲醚對U251膠質(zhì)瘤細胞的生長抑制作用，并計算半數(shù)抑制濃度(IC50)；采用ELISA法檢測蒿甲醚抑制U251膠質(zhì)瘤細胞的VEGF表達。 （1）構(gòu)建SCID小鼠人腦膠質(zhì)瘤原位模型 采用立體定位儀定位麻醉狀態(tài)小鼠，剪開頭皮后，在距矢狀縫與冠狀縫交點處分別向右向后2mm定位注射點。鉆孔后，使用10ul微量注射器垂直于顱骨在小鼠腦部定位點(右側(cè)頂葉區(qū))深5mm處，注入10ul U251人腦膠質(zhì)瘤細胞，骨蠟填封骨孔，可吸收線縫合頭皮，觀察小鼠生活狀態(tài)。在小鼠出現(xiàn)癲癇癥狀后，經(jīng)活體左心室灌注后取腦組織肉眼觀察腫瘤大體外觀及切面，并行HE染色確證腫瘤模型成功構(gòu)建。 （2）構(gòu)建24只SCID小鼠U251人腦膠質(zhì)瘤原位模型 隨機分為3組，分別為對照組(生理鹽水0.4ml/10g/d)、蒿甲醚組(蒿甲醚50.0mg/kg/d)、替莫唑胺組(20mg/kg/d)。替莫唑胺采用其粉劑制成混懸液灌胃，量為1.65mg/只/d。接種后標記小鼠，每天定時定量給藥，并記錄生存時間。約接種20天后，當SCID小鼠瀕臨死亡時行活體左心灌注，取出并固定全部腦組織，分別行肉眼觀察、HE切片染色、免疫組化，證實SCID小鼠膠質(zhì)瘤情況。 結(jié)果發(fā)現(xiàn) （1）蒿甲醚可抑制人腦U251膠質(zhì)瘤細胞增殖，其抑瘤作用呈時間和劑量依賴性； （2）蒿甲醚作用后的U251膠質(zhì)瘤細胞上清液中VEGF含量和生理鹽水組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 （3）成功構(gòu)建SCID小鼠U251人腦膠質(zhì)瘤原位模型,經(jīng)活體左心灌注后取腦組織發(fā)現(xiàn)均有腫瘤生長。 （4）蒿甲醚組和替莫唑胺組SCID小鼠的中位生存期較對照組有明顯延長(P0.05)；腦組織HE切片染色可見對照組的U251細胞核大深染，呈梭型或不規(guī)則形，高倍鏡下可見U251細胞向正常腦組織浸潤，蒿甲醚組及替莫唑胺組腫瘤細胞密集程度均明顯低于對照組。 因此蒿甲醚可抑制人腦U251膠質(zhì)瘤細胞增殖，其抑瘤效應(yīng)呈劑量-時間依賴性，且蒿甲醚可能通過抑制VEGF表達而發(fā)揮其抗腫瘤作用。研究表明，蒿甲醚可抑制SCID小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤增殖。 |
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