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值得收藏的western-blot實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
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· 濾紙、膠、膜之間的大小，一般是濾紙>=膜>=膠。 · 濾紙、膠、膜之間千萬(wàn)不能有氣泡，氣泡會(huì)造成短路。 · 因?yàn)镈EPF膜的疏水性，膜必須首先在甲醇中完全浸濕。而且在以后的操作中，膜也必須隨時(shí)保持濕潤(rùn)（干膜法除外）。 · 濾紙可以重復(fù)利用，上層濾紙（靠膜）內(nèi)吸附有很多轉(zhuǎn)移透過的蛋白質(zhì)，所以上下濾紙一定不能弄混，在不能分辨的情況下，可以將靠膠濾紙換新的。 · 轉(zhuǎn)移時(shí)間一般為1.5 小時(shí)，( 1mA-2mA/cm2，10% gel)，可根據(jù)分子量大小調(diào)整轉(zhuǎn)移時(shí)間和電流大小。 · 灌膠時(shí)盡量均勻，否則可能會(huì)出現(xiàn)氣泡。 · 為避免出現(xiàn)信號(hào)低的情況，最好選用高靈敏度的發(fā)光液，如enlight發(fā)光液等。 |
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