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yimifffffff新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化不長(zhǎng)菌 已有1人參與
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我做的重組質(zhì)粒，把1000bp的基因片段連接到5.3kb的pet26b載體上，轉(zhuǎn)化到Origami2大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，用的加了抗生素的LB平板，不長(zhǎng)菌是怎么回事呀？做了對(duì)照：空載體直接轉(zhuǎn)化，涂到抗生素平板，也是不長(zhǎng)菌；但是涂到?jīng)]加抗生素的平板上長(zhǎng)了一堆密密麻麻的小菌落，到底咋回事呀？ @biostar2009 @wizardfan @youlinglyw @飛約瘋?cè)嗽?/u> 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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2樓2020-09-06 22:36:31
cy19880610
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 時(shí)間放長(zhǎng)一點(diǎn)。一般來(lái)說(shuō)大腸桿菌8到10個(gè)小時(shí)菌斑就很大了，但是有的基因轉(zhuǎn)化進(jìn)去后會(huì)導(dǎo)致菌落生長(zhǎng)緩慢。我當(dāng)年有個(gè)基因構(gòu)建載體到大腸桿菌感受態(tài)后，需要3~5天才能長(zhǎng)出正常大小的菌斑，當(dāng)時(shí)一度以為是雜菌，構(gòu)建了2個(gè)月，后來(lái)發(fā)現(xiàn)就是這么慢，導(dǎo)致開(kāi)始生長(zhǎng)緩慢覺(jué)得平板上完全沒(méi)有生長(zhǎng)。 |
3樓2020-09-07 08:56:03
yimifffffff
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現(xiàn)在已經(jīng)32個(gè)小時(shí)了，還是一點(diǎn)都沒(méi)長(zhǎng)，我做了好幾個(gè)板子，都沒(méi)長(zhǎng)，但是沒(méi)加抗生素的板子都已經(jīng)長(zhǎng)成大菌斑了，太愁人了。。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
4樓2020-09-07 12:20:38
yimifffffff
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用的pet26b載體，抗生素是卡那，沒(méi)錯(cuò)呀，我加了雙抗，pet26b的卡那（終濃度50ug/ml）和Origami2（DE3）的四環(huán)素（終濃度50ug/ml），還做了空載體的對(duì)照（也加雙抗），都不長(zhǎng)菌，32小時(shí)了，不加抗生素的板子都長(zhǎng)了大菌斑了～ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2020-09-07 12:24:13
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
6樓2020-09-13 22:44:14
藤椒味的
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7樓2020-09-16 14:47:29
ppppzj5201
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8樓2021-04-19 22:13:54
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