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專業(yè): 生物化學

[交流] 關注｜”隱形殺手“——軍團菌

新型冠狀病毒于2019年12月首次發(fā)現(xiàn)以來，新冠疫情已經持續(xù)近三年，我們也早已習慣了出門戴口罩，每兩三天做一次核酸的生活。大家都知道新冠病毒的危害有多大，所以防范意識都很強。

然而還有一種經常藏匿在我們家中，致死率遠超新冠的“隱形殺手”——軍團菌，卻鮮有人知。

近日，阿根廷圖庫曼省衛(wèi)生局通報，發(fā)生在阿根廷的“不明原因肺炎”被證實為軍團菌感染。截至目前，該肺炎在阿根廷北部的累計確診病例數為11例，累計死亡5例。

根據世界衛(wèi)生組織的數據，軍團菌病的整體病死率在5%至10%。對于免疫系統(tǒng)較弱的人而言，這種疾病死亡率可能會達到30%，而如果沒有及時得到適當的治療，死亡率還可能會進一步上升到40%至80%。

什么是軍團菌
軍團菌（Legionella spp.）是一種革蘭氏染色陰性桿菌，是引起軍團菌�。� legionnaires disease，LD）的病原菌。1976 年美國費城退伍軍人協(xié)會大會上所爆發(fā)的重癥肺炎，該病癥被人們稱為軍團病，通過對軍團病進行的大量研究，發(fā)現(xiàn)軍團病是由軍團菌所誘發(fā)，并在 1978 年的第一次軍團病國際學術會議中將其命名為“噬肺軍團菌（Legionnella pneumophila, LP）”，自此，軍團菌導致的環(huán)境及健康問題浮現(xiàn)在大眾面前。

分類
軍團菌（Legionella）是一種廣泛存在于自然界中的機會致病菌，能引起以發(fā)熱和呼吸道癥狀為主的疾病稱軍團菌病（LD），其中最為多見和嚴重的臨床類型為以肺部感染為主，同時伴有全身多系統(tǒng)損害的軍團菌肺炎。

根據 DNA 相關性研究，軍團菌科分三個屬：軍團菌屬（Legionella)，塔特洛克菌屬(Tatlockia)和熒光桿菌屬 (Fluoribacter)。，在已知軍團菌屬中的 58 個種和 70 個血清型中，有 20 多種能引起人類疾病。嗜肺軍團菌( L . pneumophila )、米克戴德軍團菌( L . micdadei )、長灘軍團菌( L . longbeachae )、博杰曼軍團菌( L . bozemanae )和杜莫夫軍團菌( L . dumoffii )是臨床最重要的軍團菌，代表菌種為嗜肺軍團菌。

據目前美國疾控中心的統(tǒng)計研究發(fā)現(xiàn)，90%的軍團病爆發(fā)與噬肺軍團菌有關。噬肺軍團菌是引起軍團病和龐蒂亞克熱 (Pontiac fever) 的重要病原體，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其有16 個血清型 [8] ，其中血清 1 型（Lp1）是引起疾病最常見的臨床和環(huán)境分離株，其次為 4 型和 6 型。

根據2007年世界衛(wèi)生組織（WHO）指南，軍團菌病分為3種亞型：

①肺炎型軍團菌病（LD）以肺炎為主要臨床表現(xiàn)的軍團菌感染，又稱軍團菌肺炎；

②肺外綜合征，即感染從肺部播散至肺外其他系統(tǒng)；

③龐蒂亞克熱，主要表現(xiàn)為急性發(fā)熱，病程呈自限性。

男性多于女性，老年人、吸煙酗酒者以及免疫功能低下者易患此��！

生物學特性
軍團菌屬革蘭氏染色陰性，桿狀，菌體大小為 0.3～0.9 μm×1.5～5.0 μm，常呈兩端鈍圓長絲狀或紡錘狀，但不同生長期細胞可為不同形態(tài)，有顯著多形性�；緵]有莢膜和芽孢，大多有一端鞭毛和有傘狀菌毛。Dieterle 鍍銀染色為黑褐色，Giemsa 染色為紅色。

軍團菌需氧，最適生長溫度為35~37℃，最適pH為6.4~7.2，每年7、8、9月軍團菌肺炎較高發(fā)。軍團菌很喜歡在溫水及潮熱的地方生存蔓延，空調、熱水器、淋浴器、溫泉等都是它生長繁殖的溫床。

對自然界抵抗力強，在水中至少可生存 415天。在 1%福爾馬林、70%乙醇或0.125%戊二醛溶液中,1分鐘死亡。

如何傳播
1、傳染源：被污染的各種水源。

2、傳播途徑：主要的感染途徑是人吸入被污染的氣溶膠，氣溶膠來源包括空調冷卻塔、冷熱水系統(tǒng)、加濕器、溫泉等。感染可通過吸入受污染的氣溶膠而發(fā)生，特別是易感的住院病人。

3、易感人群：免疫力尤其是細胞免疫力低下者。

流行病學
軍團菌肺炎，在國外早已是常見病癥，但國內在臨床軍團菌病方面仍處于初級水平，臨床標本的檢出率極低，環(huán)境標本的檢出率約為40%，目前，被軍團菌污染水體是對人類安全健康構成最大威脅的傳染源。從 1982 年南京首次爆發(fā)軍團菌病癥以來，我國對軍團菌病的暴發(fā)流行的報道此起彼伏，對于臨床標本和環(huán)境標本菌體的檢出率也呈上升趨勢。由于對中央空調水塔系統(tǒng)的設計和管理建設的不當，極易造成軍團菌污染，使之成為造成軍團菌病的主要罪魁禍首。

當我們處于含有軍團菌氣溶膠的環(huán)境中時，通過呼吸，軍團菌可直接進入我們的呼吸系統(tǒng)，吸附中性粒細胞或吞噬細胞，進入并形成小體，繁衍生殖導致細胞破裂死亡，所產生的淋巴因子和細胞毒性因子損害肺臟。此外，軍團菌還可以直接產生并釋放各種酶和毒素，損害肺臟。軍團菌病以肺炎為主要表征，同時常常伴隨多系統(tǒng)損害，其臨床癥狀非常不典型導致其常被誤診，故而死亡率高且易爆發(fā)流行。

由于目前還沒有研發(fā)軍團菌病的預防疫苗，只能通過及時發(fā)現(xiàn)、及時就醫(yī)來避免軍團菌造成的傷亡。同時需有關部門對冷卻塔和水管網等軍團菌可能大量增值的設施設計管理與清理維修，以及相關大型公共場所空調系統(tǒng)及水系統(tǒng)的及時清理來對軍團菌病進行預防。

檢測方法
科技飛速發(fā)展，人們生活水平日益提高，空調體系遍布全球的每個角落，供水系統(tǒng)應用更是廣布，這無疑給軍團菌提供了生存的溫床，軍團病發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢，這讓我們不得不把軍團病重視起來。與此同時，我們還需要進一步研究病原標本及水環(huán)境中所分離出的軍團菌株的遺傳關系和差異，對軍團菌進行分類和分型，從而確定軍團菌病的發(fā)生、傳播與流行之間的關系。軍團菌的常用檢測方法如下。

細菌培養(yǎng)法

軍團菌是一種對養(yǎng)分要求很高的苛養(yǎng)菌，分離培養(yǎng)較為困難，專性需氧，專性需氧，CO 2 環(huán)境可促進生長，最適生長溫度 35 ℃，必須在 pH6.8～pH7.0，含α 酮戊二酸、 L-半胱氨酸和鐵鹽的培養(yǎng)基上才能生長。檢測軍團菌感染的金標準就是細菌培養(yǎng)方法，我們通過在 BCYE 培養(yǎng)基中加入 0.01%溴甲酚紫和 0.001%溴酚藍，來鑒定軍團菌科。我國多采用 BALM 培養(yǎng)基取代價格較高的 BCYE 培養(yǎng)基。作為臨床確診鑒定的金標準，培養(yǎng)法具有較強的敏感性和特異性，但又有價格昂貴、耗時長、難度大等缺陷。

免疫血清檢測

免疫血清學檢測方法主要有血清抗體檢測和特異性抗原檢測手法，這種檢測手段得到的檢測結果可信度高，易于操作，但缺點是容易產生假陽性和交叉反應。

分子生物學方法

選擇軍團菌的特異性基因片段，設計引物、探針，通過擴增或雜交的手段來診斷軍團菌。目前研究中常用的片段主要包括：16SrRNA，5SrRNA，mip 基因，23S-5S間區(qū)等。

探針檢測技術以核酸雜交反應為檢測原理，在一定的條件下，探針與微生物基因組發(fā)生互補雜交反應，來鑒定有無軍團菌的感染。根據標記方式不同，探針可分為放射性同位素標記、生物素標記、酶標記和熒光素標記等等。目前該方法已被美國疾控中心用作對軍團菌檢測分類的一種常規(guī)手段，核酸雜交方法特異性強，且檢測限可達到 10 CFU/mL，能檢測出微生物的群落結構信息，但又存在探針序列復雜、重復性差等缺陷。

聚合酶鏈式反應 PCR 是目前應用最為廣泛的分子生物學檢測技術，用實時熒光定量 PCR 技術檢測軍團菌樣本具有靈敏度高、特異性好的優(yōu)點，但需要昂貴的儀器、專業(yè)的實驗室等，不能達到現(xiàn)場檢測的要求。

近些年發(fā)展迅速的等溫擴增技術具有等溫、快速、操作簡單和特異性好、靈敏度高、設備要求低等優(yōu)點，適合在基層及戶外現(xiàn)場進行各類病原體快速檢測。特別是重組酶與聚合酶檢測技術可在 37-42 ℃的等溫條件下、5-20 min 實現(xiàn)特定核酸的快速擴增。

重組酶與聚合酶檢測技術因其反應時間短，特異性強，結果肉眼可見、對設備技術要求低等優(yōu)勢，已逐漸被應用于致病微生物的快速檢測、轉基因成分檢測、疾病診斷等領域。

RAPID技術平臺可用于軍團菌現(xiàn)場快速檢測，為軍團菌防控檢測提供一種新的、可靠的技術支持。

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1樓 2022-09-27 10:52:17

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