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科研小努力新蟲 (小有名氣)
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[交流]
柯薩奇病毒B3致病毒性心肌炎動物模型
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心肌炎是什么病？ 心肌炎是指心肌發(fā)生的的局限性或彌漫性炎癥病變，可由多種病因引起，主要是由病毒、細(xì)菌、立克次體等病原微生物感染而致，其中以病毒性心肌炎最為常見，如柯薩奇B組病毒、Echo病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、流感病毒等感染都可引起，另外免疫因素、物理損傷、藥物等非感染因素也會引起心肌炎的發(fā)生。 目前該病發(fā)病機(jī)制不清，仍然沒有藥物可以完全治愈心肌炎。所以，建立合適的心肌炎模型，為研究心肌炎的發(fā)生發(fā)展機(jī)制和篩選治療藥物具有重要意義。 目前心肌炎模型多以心肌肌球蛋白(Cardiac myosin，CM)誘導(dǎo)，多肽誘導(dǎo)，樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)，柯薩奇病毒感染等方法構(gòu)建。今天小編將柯薩奇病毒B3致病毒性心肌炎動物模型進(jìn)行詳解。 造模方法 選取4周齡雄性近交系BALB/C小鼠，體重（15~19）g，分為實(shí)驗(yàn)組和正常組。 注射部位常規(guī)消毒后，腹腔注射10-5即100TCID50/0.1 ml CVB3 0.1 ml，正常組腹腔注射等量0.1 mmol/L磷酸鹽緩沖液0.1 ml。接種病毒時間定為第0天，至第7天時隨機(jī)從各組取5只小鼠，于眼眶采血后處死小鼠留取心臟，將血離心分裝、血漿凍存，將心臟沖洗稱重后，用10%甲醛固定待做病理組織學(xué)檢查，剩余小鼠飼養(yǎng)至第21天時，全部處死留取心臟，將心臟沖洗稱重后，用10%甲醛固定待做病理組織學(xué)檢查。 存活達(dá)第21天者視為存活，各組小鼠處死之前稱重，心臟稱重前用濾紙吸凈。計(jì)算心臟重量/體重（HW/BW）比值與生存率。 各組小鼠用10%甲醛固定后石蠟包埋切片，HE染色,鏡下觀察組織病理學(xué)改變并記分。炎癥細(xì)胞浸潤，心肌壞死占每張心臟切片<25%（+）計(jì)1分，25%～50%（++）計(jì) 2 分，50%～75%（+++）計(jì) 3 分，>75% 計(jì) 4分。 采用自動生化分析儀測定血清肌酸激酶同工酶CK-MB的含量。 試驗(yàn)結(jié)果 1、HW/BW比值與生存率 實(shí)驗(yàn)組與正常組HW/BW比值結(jié)果分別為（0.0068±0.0006）和（0.0049±0.0001），兩組比較P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、病理學(xué)檢查結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組小鼠心臟外膜肉眼可見少量白色點(diǎn)狀、條紋狀、斑塊狀以及出血點(diǎn)等。正常組無此現(xiàn)象。CVB3感染小鼠后第7天炎癥細(xì)胞灶性浸潤，分布在溶解壞死的心肌周圍，更有意思的是發(fā)現(xiàn)大量淋巴細(xì)胞圍繞神經(jīng)組織浸潤。 3、組織學(xué)檢查結(jié)果 第7天時從各組隨機(jī)抽取5只小鼠光鏡檢查，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組小鼠心肌均有變性、壞死、炎癥細(xì)胞浸潤或有鈣鹽沉著，組織評分最低分為2.1分，最高分為4分；正常組未發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤與心肌壞死。 4、心肌酶CK-MB結(jié)果 第7天時試驗(yàn)組小鼠為(188.5±35.6)U/L，正常組為(45.3±11.2)U/L，兩組比較 P＜0.01。 注意事項(xiàng)：病毒接種濃度要正確的配制。因心肌酶的升高與心肌的損傷基本平行，高濃度的病毒感染可致宿主細(xì)胞快速變性壞死，溶解。 選用BALB/C小鼠構(gòu)建柯薩奇病毒感染引起的心肌炎模型（腹腔注射），造模方法簡單，模型的成功率可達(dá)100%，重復(fù)性好，病理變化符合臨床病毒性心肌病變，可用來研究病毒性心肌炎的生理，病理生理、生化等改變，也用于研究心肌炎的自然病程以及藥物治療心肌炎的療效及其作用機(jī)制以及篩選抗病毒性心肌炎藥物。 |
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