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科研小道新蟲 (初入文壇)
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菌株熒光標(biāo)記方法 已有1人參與
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綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作為一種理想的活體熒光標(biāo)記分子，越來越多地被用于活細(xì)胞或微生物的定位、結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)的研究，也可以通過測(cè)定GFP的熒光強(qiáng)度對(duì)菌株中GFP的表達(dá)量進(jìn)行定量分析[1]。GFP已經(jīng)在許多細(xì)菌中完成了轉(zhuǎn)化，如：（1）利用GFP追蹤了乳酸乳球菌WH-C1在小鼠腸道內(nèi)的定植情況；（2）利用GFP發(fā)現(xiàn)德氏乳桿菌D17嵌入在黏液層中，局部接近腸道的上皮細(xì)胞；（3）在植物乳桿菌WCFS1中進(jìn)行GFP標(biāo)記，研究WCFS1在腸道內(nèi)的定植與分布。 紅色熒光蛋白 (Red Fluorescent Protein, RFP)相比綠色熒光蛋白 (GFP)其靈敏度更高, 是基于GFP基礎(chǔ)上的一種優(yōu)良穩(wěn)定的熒光蛋白。目前已在不同的菌株中成功進(jìn)行RFP標(biāo)記，如：（1）在根瘤菌中進(jìn)行RFP熒光標(biāo)記，可探究根瘤菌結(jié)瘤固氮能力及根瘤菌與土著菌競(jìng)爭關(guān)系 [2]；（2）構(gòu)建了以紅色熒光蛋白基因 (dsred2) 為標(biāo)記, 以α-淀粉酶 (amy) 為報(bào)告基因的表達(dá)載體, 成功實(shí)現(xiàn)了融合基因dsred2-amy在干酪乳桿菌中的融合表達(dá)；（3）銅綠假單胞菌中轉(zhuǎn)入RFP標(biāo)記，證實(shí)其在含油多孔物質(zhì)中的遷移擴(kuò)散及所受限制[3]；（4）在幽門26695中構(gòu)建了GFP和RFP熒光標(biāo)記，用于探究幽門的遺傳調(diào)控和信號(hào)追蹤[4]。 mCherry熒光蛋白也叫櫻桃熒光蛋白，是從蘑菇珊瑚（mushroom coral）中分離出來的單體紅色熒光蛋白，相較于其它單體熒光蛋白，其顏色和單體分子的光穩(wěn)定性更強(qiáng)。mCherry熒光標(biāo)記技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和神經(jīng)科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用，用于追蹤蛋白質(zhì)、細(xì)胞器或其他生物大分子在活細(xì)胞中的分布和動(dòng)態(tài)。近年來, mCherry用于熒光標(biāo)記的研究報(bào)道逐漸增多, 相對(duì)其他熒光蛋白, 該熒光標(biāo)記具有標(biāo)記基因小、背景低等優(yōu)點(diǎn), 且與已報(bào)道的dsred2紅色熒光基因相比, 其熒光強(qiáng)度及穩(wěn)定性更好。目前已成功在多種菌株中進(jìn)行標(biāo)記：如：（1）成功在蒙氏腸球菌ST4SA和植物乳桿菌423中進(jìn)行mCherry熒光蛋白標(biāo)記；（2）在植物乳桿菌中進(jìn)行mCherry熒光蛋白標(biāo)記，是探究其在生物體內(nèi)的定位、示蹤及益生性作用機(jī)制的有效技術(shù)手段[5]。 實(shí)驗(yàn)流程： 1：構(gòu)建熒光標(biāo)記載體； 2：電轉(zhuǎn)至受體菌； 3：涂布抗性篩選平板； 4：抗性篩選培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)； 5：PCR驗(yàn)證質(zhì)粒是否存在； 6：紫外驗(yàn)證熒光； 7：抗性篩選培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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2樓2024-05-28 10:51:26
科研小道
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 99
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- 蟲號(hào): 35263946
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- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
3樓2024-05-29 09:39:52
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