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雪山飛狐7233鐵桿木蟲 (著名寫手)
鐵桿小蟲
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[交流]
請(qǐng)各位做過(guò)SOE-PCR的各位大俠不吝賜教！！經(jīng)確認(rèn)將獎(jiǎng)勵(lì)50金幣或更多！
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| 本人想用SOE-PCR的方法擴(kuò)增一個(gè)78bp的基因，設(shè)計(jì)了三個(gè)引物（P1、P2、P3），其中P1、P3是正常的引物，P2的3‘端與P1的3’端 互補(bǔ)，P2的5‘端與P3的3’端互補(bǔ)部分相同。我P出來(lái)的結(jié)果大小與產(chǎn)物相同，但是我不加P2也能P出結(jié)果來(lái)，請(qǐng)問(wèn)這是為什么？ |
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2樓2009-11-06 08:46:43
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本人有做過(guò)啊，就是overlapping PCR啊，你引物設(shè)計(jì)有問(wèn)題吧，感覺你引物設(shè)計(jì)的不對(duì)，序列就只有78bp，就要做什么啊，定點(diǎn)突變還是缺失突變啊，78bp用不著做PCR啊，直接合成都行。 你確認(rèn)只是78bp嗎？ [ Last edited by gyesang on 2009-11-6 at 09:29 ] |
3樓2009-11-06 09:16:46
gyesang
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4樓2009-11-06 09:31:47
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你這個(gè)基因才78bp，完全可以直接合成。一般的公司對(duì)<=59bp和>=60bp的引物價(jià)格是兩個(gè)檔次，如果你嫌貴，可合成兩條短于59bp的引物，這兩條引物在3'端互補(bǔ)，5'端就是你的基因兩端。加入PCR的原料，把這兩條引物退火，即可讓它們延伸為79bp的全長(zhǎng)基因。注意，如果用Taq polymerase，則會(huì)多加一個(gè)A。 沒(méi)有必要用三條引物。 |
5樓2009-11-06 10:31:08
雪山飛狐7233
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6樓2009-11-06 10:59:55
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7樓2009-11-06 15:51:42
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8樓2009-11-10 11:00:04
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