 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1919 | 回復: 9 | |||
| 當前主題已經(jīng)存檔。 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
RNA 操作注意事項與實驗技巧
|
|||
|
我這里有一點RNA 操作注意事項與實驗技巧的資料，與大家共分享 RNA 操作注意事項與實驗技巧 操作注意事項： 由于RNA酶的廣泛存在與難以滅活的頑固特性。使得RNA的提取純化和后續(xù)工作變得非常困難。為了保證RNA的研究工作成功，請仔細閱讀下列注意事項，相信它能幫助您解決常見的問題。 歸根究底，RNA工作的主要問題是防止RNA酶的污染。RNA酶無處不在，在實驗操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不當操作都有可能造成RNA酶污染，從而導致整個實驗失敗。因此，嚴格控制實驗條件，避免任何可能的污染是保證實驗成功的關(guān)鍵，必須做到以下幾點： 1.如果可能，實驗室應辟出專門RNA操作區(qū)，離心機、移液槍、試劑等均應專用。RNA操作區(qū)應保持清潔，并定期進行消毒。 2.操作過程中應自始至終佩戴拋棄式橡膠或乳膠手套，并經(jīng)常更換，以避免將手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的RNA酶帶入試管或污染用具。盡量避免使用拋棄式塑料手套。塑料手套不貼身，常常造成操作不便，而且多出部分還容易在器具上遭RNA酶污染并向未污染處傳遞，擴大污染。 3.盡量使用一次性槍頭、離心管等塑料制品，盡量避免與其它實驗共享器具，以防止交叉污染。推薦使用出廠前已經(jīng)滅菌的槍頭和離心管，大多國外廠商供應的無菌塑料制品很少有RNA酶污染，買來后可直接用于RNA操作。許多研究者用DEPC等處理的塑料制品，往往由于二次污染而帶有RNA酶，從而導致實驗失敗。 4.配制溶液用的酒精，異丙醇、Tris等應采用未開封的新品。溶液需用DEPC水配制（加0.01%(體積比)DEPC至重蒸水或Mili Q級水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水）。 5.所有玻璃制品都必須在240℃烘烤4小時。所有舊塑料制品都必須用0.5M的NaOH處理10分鐘，并用DEPC-H2O徹底沖洗后滅菌，也可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。無法用DEPC處理的用具可以用氯仿擦拭若干次，這樣通�？梢韵齊NA酶的活性。 樣本保存的注意事項： 樣本一旦從生物體中分離后，細胞內(nèi)的RNA就變得非常不穩(wěn)定，容易降解。因此取樣后，如何保證取樣前后基因的表達模式不變，就變得非常重要。傳統(tǒng)方法是用液氮速凍，再放到超低溫冰箱中保存。 目前有些廠家開發(fā)出專門的RNA保護劑，如Qiagen公司的RNAlater是具有抑制RNase和穩(wěn)定RNA作用的試劑，將采集的組織樣本等直接放入到RNAlater中，即可起到穩(wěn)定樣本中RNA的作用。無需液氮或干冰，方便安全地在室溫下保存一段時間，低溫可長期保存。還有對細菌樣本專用的RNAprotect Bacteria Reagent及對血液樣本專用的PAXgene™ Blood RNA System。 RNA的定量與純度： RNA通常用分光光度計定量，測量在260 nm處的吸收值（A260）。通常分光光度計A260的讀數(shù)要介于0.15-1.0之間才是可靠的，因此RNA提取結(jié)束后，要根據(jù)大概產(chǎn)量稀釋（推薦用10 mM Tris.HCl, pH 7.0稀釋）到適當濃度范圍，再用分光光度計測量。A260為1相當于RNA的濃度為40 µg/ml。 為了檢測RNA的純度，可以測量A260與A280的比值，通常純RNA的A260/A280為1.9-2.1。 |
回復此樓» 猜你喜歡
291求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
309求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
085601材料工程找調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復
-
297求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復
-
一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有6人回復
-
070305高分子化學與物理 304分求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復
-
環(huán)境工程 085701，267求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
一志愿鄭州大學，080500學碩，總分317分求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復
-
考研調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
南京大學化學調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
我是醒目
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 5718.4
- 散金: 137
- 紅花: 3
- 帖子: 2671
- 在線: 142.4小時
- 蟲號: 115809
- 注冊: 2005-11-24
- 專業(yè): 職業(yè)技術(shù)教育學
5樓2006-01-06 21:32:57
zhzliang
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1394.2
- 帖子: 108
- 在線: 12.3小時
- 蟲號: 130735
- 注冊: 2005-12-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
2樓2006-01-04 22:43:45
，剛剛做完RNA方面的，應該早一點看 3樓2006-01-05 18:49:05
4樓2006-01-06 19:02:18
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷 +6 | cccchenso 2026-03-29 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿武漢理工大學材料工程（085601） +7 | WW.' 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +5 | 汲亦昊 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化求調(diào)劑 +4 | Jsman 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +7 | 星野? 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調(diào)劑 +6 | 崔wj 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[碩博家園] 求調(diào)劑 有機化學考研356分 +3 | Nadiums 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 本科新能源科學與工程，一志愿華理能動285求調(diào)劑 +7 | AZMK 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學化學0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703本科鄭州大學求調(diào)劑 +3 | nhj_ 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085405 考的11408求各位老師帶走 +3 | Qiu學ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南師大0703化學 275求調(diào)劑 +4 | Ripcord上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學 070300 學碩 336分 求調(diào)劑 +9 | vv迷 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理 材料求調(diào)劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +6 | 加一一九 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|