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科研檢測交流
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[交流]
【實驗干貨】生物超薄切片+HRTEM：線粒體嵴原子像一步到位
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【取材】 心肌1 mm³，3 %戊二醛-0.1 m二甲胂酸鈉4 ℃過夜，防冰晶；pbs洗3×10 min，去游離醛。 【后固定】 1 % oso4 4 ℃ 1 h，導電+反差；梯度丙酮30-50-70-90-100 %各10 min，徹底脫水。 【包埋】 epon 812梯度滲透2 h，純樹脂過夜；60 ℃聚合48 h，硬度適中，切片不顫。 【切片】 鉆石刀45°，70 nm銀白光，200目銅網(wǎng)撈片；2 %醋酸鈾酰-檸檬酸鉛各5 min，雙染色增襯。 【hrtem】 tf-20 200 kv，低劑量<100 e⁻ Å⁻²，spot 9，c s≈0，像素0.05 nm；線粒體嵴0.22 nm晶格可見，無輻照皺縮。 【心得】 鈹臺plasma 30 s除烴；干燥劑保存<24 h上機，防吸水變形；autoctf自動校正像散，30 min拿原子級gif，導師群秒贊！ |
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