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氧化鉭納米顆粒作為X射線計(jì)算機(jī)斷層成像的通用造影劑
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介紹 在這里，我們描述了一系列用于計(jì)算機(jī)斷層成像(ct)的氧化鉭(taox)基納米粒子(nps)的合成、表征和體內(nèi)外性能。通過溶膠-凝膠法制備了五種不同形式的直徑為9-12 nm的硅烷涂覆的taox納米晶體(ncs ),其具有不同程度的親水性，并且具有或不具有熒光，具有迄今報(bào)道的最高ta含量(78%)。將高親水性ncs裸露，并在小鼠體內(nèi)對全身脈管系統(tǒng)的顯微ct進(jìn)行評估，其中靜脈注射后，taox ncs表現(xiàn)出高ct對比度，在血液中循環(huán)約3小時(shí)，并最終在靜息器官中累積；并且在乳腺中局部注射后，可以清楚地描繪出完整的導(dǎo)管樹結(jié)構(gòu)。部分親水的納米顆粒被包裹在介孔二氧化硅納米顆粒(msnpstaox@msnps)和疏水性ncs被包封在聚(乳酸-共-乙醇酸)(plga；taox@plga)納米顆粒，用作潛在的ct可成像的藥物遞送載體�？焖偌∪庾⑸鋞aox@plga nps和taox@msnps以模擬腫瘤部位nps的積累，在小鼠中產(chǎn)生高信號(hào)增強(qiáng)。對裸納米細(xì)胞和配制納米顆粒的體外研究表明，taox具有高細(xì)胞相容性和低溶出度。這項(xiàng)工作證實(shí)了基于taox的納米顆粒是ct的通用造影劑。 在造影劑(cas)、成像系統(tǒng)、圖像采集方案和圖像分析策略的創(chuàng)新推動(dòng)下，x射線計(jì)算機(jī)斷層掃描(ct)已經(jīng)發(fā)展成為一種重要的分子成像工具。ct cas通過衰減x射線位置，在ct圖像中產(chǎn)生信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)分子成像。碘(z=53)是臨床上最常用的元素。并且是許多fda批準(zhǔn)的ct cas中的可成像成分。含有鋇(z=56)的ct cas也用于臨床。這些化學(xué)元素具有獨(dú)特的變化的x射線衰減，作為x射線能量的函數(shù)，可用于多種分子成像方法，包括雙能ct材料分解和光譜光子計(jì)數(shù)ct. ct分子成像需要制備包含這些元素的新ca，事實(shí)上，許多報(bào)告已經(jīng)詳細(xì)實(shí)驗(yàn)了包含銀、ag (z=47)、釓、gd (z=64)、鐿、yb (z=70)、鉭、ta (z=73)、鉑、pt (z=78)、金、au (z=79)和鉍、bi (z=83)等的ct ca。 ta對當(dāng)今臨床ct系統(tǒng)中使用的x射線具有高衰減(80-140 kvp ),并產(chǎn)生比au或i更高的ct對比度。ta納米晶體(ncs)、ta2o5和taox的合成方案得到了很好的描述且可重復(fù)，分析方法簡單明了。此外，多份報(bào)告已經(jīng)證實(shí)，ta基納米材料在生物醫(yī)學(xué)環(huán)境中表現(xiàn)出低毒性。最后，ta是一種相對便宜的材料，是商業(yè)化的重要長期考慮因素。 通常，表面保護(hù)的ta nps被配制成非常小的np，用作可注射的cas。例如，通過異丁酸穩(wěn)定的ta2o5核上的硅烷表面配體混合物的水解和縮合，制備了兩性離子型亞10 nm ta2o5納米粒子。這些粒子已被證明是一種安全有效的ct ca，在臨床ct場景中，特別是在大型成人中，其效率比i更高。在一項(xiàng)單獨(dú)的研究中，5-10 nm ta2o5納米粒子也已用于通過與帶電軟骨基質(zhì)的相互作用對軟骨進(jìn)行成像。 taox納米顆粒表面具有與硅烷反應(yīng)的高傾向性，這用于后續(xù)的表面改性，以生成親水性良好分散的納米顆粒。 在這項(xiàng)工作中，我們首先合成了一個(gè)初步的硅烷涂層taox nc (nc0)，然后我們可以對其進(jìn)行化學(xué)修飾，以賦予不同程度的親水性和熒光性。這些ncs (nc1)的高度親水版本被裸露出來，并進(jìn)行血管/脈管成像研究。這些ncs的適度親水版本(nc2)和這些ncs的疏水版本(nc3)被分別封裝到兩個(gè)不同的聚合結(jié)構(gòu)中；nc2轉(zhuǎn)化為介孔二氧化硅納米粒子(msnp ), nc3轉(zhuǎn)化為聚乳酸-羥基乙酸共聚物(plga)納米粒子。這兩種np類型是有前途的藥物遞送載體，其中taox使得通過ct進(jìn)行圖像引導(dǎo)藥物遞送成為可能。使用這一組不同的納米粒子進(jìn)行的一組多種多樣的體內(nèi)微型ct演示證實(shí)了基于taox的納米粒子的多功能性和實(shí)用性，并且最初的體外和體內(nèi)毒理學(xué)試驗(yàn)表明這些材料具有急性無毒性質(zhì)，這鼓勵(lì)了基于taox的納米粒子在臨床ct分子成像方面的進(jìn)一步發(fā)展。 實(shí)驗(yàn) 合成程序 taox nc合成:在裝有隔膜的250 ml單頸圓底燒瓶中，igepal-co-520[聚(氧乙烯)壬基苯基醚]，mn 44123.0克]，環(huán)己烷(200毫升)和乙醇(2.5毫升)，并攪拌內(nèi)容物以獲得澄清溶液。向該攪拌混合物中加入氫氧化鈉溶液(100 mm，2.5 ml)，并在水浴中超聲處理該微乳液以確保均勻性。接下來，一次加入乙醇鉭(v)(ta2o 5，0.5 ml)，并將內(nèi)容物在環(huán)境溫度下攪拌20分鐘。加入ta2o5后，原本清澈的溶液變得輕微渾濁，表明形成了未包覆的ncs，我們稱之為nc0。在反應(yīng)的這個(gè)階段，加入不同的硅烷端基反應(yīng)物以形成具有不同程度的親水性/疏水性的nc，或者將熒光標(biāo)記附加到nc表面。在單獨(dú)加入2-[甲氧基(聚乙烯氧基)-9-12-丙基]三甲氧基硅烷(peg-硅烷，3.0 ml)并隨后處理后，分離出部分親水的taox nc2。在同一階段，添加(3-氨丙基)三甲氧基硅烷(aptms，0.028 ml)并隨后使用甲氧基-聚(乙二醇)-琥珀酰亞胺戊二酸酯(m-peg-sg-200，50 mg)在乙醇產(chǎn)生高度水溶性的taox nc1。改變peg-硅烷和aptms的比例有利于后者的更高濃度(1∶6的比例，v/v)，隨后的處理導(dǎo)致疏水性taox nc3。為了合成各自的熒光類似物，在加入peg-硅烷和aptms后，將預(yù)先形成的fitc-aptms接頭引入反應(yīng)混合物中，隨后的步驟在黑暗中進(jìn)行。向各自的親水/疏水反應(yīng)混合物中加入熒光接頭，分別導(dǎo)致形成親水的fitc-taox nc4和疏水的fitc-taox nc5。一旦反應(yīng)完成，通過離心將所有類型的nc分離為油狀沉淀，并通過使用12-14 kda mwco透析袋在水中徹底透析來純化，隨后凍干以產(chǎn)生干粉形式的nc。 細(xì)胞培養(yǎng) 一般信息raw 264.7(鼠巨噬細(xì)胞)和hek 293(人胚胎腎細(xì)胞)使用補(bǔ)充有10% (v/v)胎牛血清(fbs，gibco)和青霉素/鏈霉素(100單位ml-1)的杜爾貝科氏改良伊格爾培養(yǎng)基[dmem (1x)，gibco]以單層生長1和100g·ml-1，抗-抗(100-x)，抗生素-抗真菌，gibco ]在37°c、含5% co2的潮濕空氣中體外細(xì)胞生存力研究使用3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物測定法對與taox ncs、taox@plga nps和taox@msnps一起孵育的raw 264.7和hek 293細(xì)胞的細(xì)胞生存力進(jìn)行評估。在一個(gè)典型的實(shí)驗(yàn)中，每孔1×104個(gè)細(xì)胞在96孔板中培養(yǎng)過夜。接下來，將細(xì)胞與不同濃度的taox ncs和nps (0、0.0375、0.075、0.15、0.30、0.60、1.2和2.4mg ta ml-1)一起孵育24小時(shí)。在孵育期后，用pbs洗滌細(xì)胞三次，并與含有mtt試劑(0.5 mg ml-1)的培養(yǎng)基一起孵育4小時(shí)，以允許形成甲晶體。接下來，將增溶試劑加入每個(gè)孔中，并在進(jìn)一步溫育以完全溶解在先前步驟中獲得的紫色晶體后，使用uv-vis微板讀數(shù)器(spectramax 190，molecular devices)在570 nm處測量來自板的分光光度吸光度。 顯微ct成像 體模成像:對于體外體模測量，制備不同濃度(0、20、50、80和100 mm ta)的taox nc1鹽水溶液。幻影ct圖像是在perkin elmer quantum gx微型ct掃描儀上獲得的，該掃描儀在90 kvp和88 a下工作體內(nèi)微ct我們使用微ct在一系列不同的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中展示了taox納米粒子的多功能性。 實(shí)驗(yàn)1:血管成像。balb/c小鼠(查爾斯河實(shí)驗(yàn)室有限公司；性別，男；年齡，~ 3個(gè)月；體重約25克)接受100mm(296mg·kg-1 taox顆粒)(n = 2)或200mm(592.3mg·kg-1 taox顆粒)(n = 3)的taox ncs(在無菌鹽水(0.9%氯化鈉)中配制)的單次靜脈劑量。使用perkin elmer量子gx顯微ct在0小時(shí)(基線)、注射后立即、注射后1小時(shí)、3小時(shí)、24小時(shí)和72小時(shí)通過顯微ct對動(dòng)物進(jìn)行連續(xù)成像。 實(shí)驗(yàn)2:乳腺導(dǎo)管樹成像。fvb mice(查理斯河實(shí)驗(yàn)室有限公司；性別，女性；年齡，9-10周)，使用perkinelmer quantum gx微型ct掃描儀在導(dǎo)管內(nèi)注射后的不同時(shí)間連續(xù)成像37，使用含有60或100 mm氧化鉭納米晶體的溶液作為造影劑。連續(xù)顯微ct掃描:2分鐘采集；90 kvp/88a；fov，36毫米；體素分辨率，72立方米。 實(shí)驗(yàn)#3:成像taox嵌入的納米顆粒在單個(gè)位點(diǎn)的“積累”。taox包埋的nps在單個(gè)位點(diǎn)的累積，例如在腫瘤靶向的情況下，通過在右腿和左腿肌肉中以單次大劑量肌肉注射濃縮的nps來模擬。在注射27.4毫克/千克的鹽水(50毫米ta)或13.7毫克/千克的鹽水(25毫米ta) taox@plga nps和36.8毫克/千克的鹽水(50毫米ta)或18.4毫克/千克的鹽水(25毫米ta) taox@msnp-phos后，對動(dòng)物(n = 3)進(jìn)行顯微ct。在單個(gè)掃描時(shí)間點(diǎn)，使用與實(shí)驗(yàn)#1中相同的micro-ct掃描參數(shù)評估注射的小鼠；使用caliper analyzedirect，v12.0(生物醫(yī)學(xué)成像資源，mayo clinic，rochester，mn)進(jìn)行注射后立即進(jìn)行全身或單個(gè)乳腺的顯微ct圖像繪制、分割和分析。 結(jié)果與討論 taox ncs的合成各種taox ncs的一般合成方法如方案1所示(支持信息，方案s1-s3，esi)。在第一步中，形成表面活性劑促進(jìn)的微乳液，該微乳液充當(dāng)用于產(chǎn)生初步taox ncs (nc0)的反應(yīng)室。在向該微乳液中加入乙醇鉭(v)時(shí)，堿催化的溶膠-凝膠反應(yīng)發(fā)生，導(dǎo)致nc0.19的快速形成 反應(yīng)微乳液中的這些初級(jí)taox ncs的酸性(ph = 5)表面具有側(cè)羥基，這些側(cè)羥基具有與硅烷進(jìn)行縮合反應(yīng)的高傾向，因此，添加具有硅烷封端(peg-硅烷)的聚(乙二醇)部分導(dǎo)致形成良好分散的親水性taox ncs。 a使用icp-oes報(bào)告的ta含量；b直徑、pdi和ζ電勢使用dls報(bào)告；c直徑使用image j軟件分析的tem圖像報(bào)告。 taox nc的特性表1列出了不同taox nc類型的詳細(xì)特性。親水性nc1的透射電子顯微鏡(tem )(圖1a，b；圖s3，esi)和部分親水的nc2(圖1c，d；圖s8，esi)分散在水中，和疏水性nc3(圖1e，f；圖s13，esi)分散在己烷中，證實(shí)taox ncs均勻且分散良好，粒徑分布較窄，約為9-12 nm。通過動(dòng)態(tài)光散射(dls)測量，分散在水中的nc1和nc2的流體動(dòng)力學(xué)尺寸(粒徑)為約12-18 nm(表1)。 x射線衍射(xrd)實(shí)驗(yàn)顯示了ncs的無定形性質(zhì)(nc1，圖s4；nc2，圖s9和nc3，圖s14，esi)。使用能量色散譜(eds)和x射線光電子譜(xps)證實(shí)了ta及其電子態(tài)的存在以及si的存在。所有taox nc變體的eds光譜顯示了ta和si的清晰峰，證實(shí)了這些元素的存在(nc1，圖s5，esinc2，圖s10，esinc3，圖s15，esi)。 為了評估ncs在這種條件下抗溶解的穩(wěn)定性，在37℃的磷酸鹽緩沖鹽水(pbs，ph 7.4)和檸檬酸鈉(nacit，ph 5.5)中進(jìn)行了為期4周的體外溶解研究。在pbs中孵育模擬細(xì)胞溶質(zhì)和細(xì)胞外ph；而nacit，ph 5.5模擬胞吞后溶酶體環(huán)境。esi第3.2節(jié)描述了本研究的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)。簡而言之，在37℃下，將taox nc3和taox nc5懸浮在各1 ml的pbs和nacit中，并在整個(gè)研究期間(無限下沉條件)的定期時(shí)間點(diǎn)取出等分試樣，使用icp-oes分析ta含量并歸一化以獲得累積的ta釋放。ta釋放繪制在圖2中(圖s30，esi ),顯示了在pbs(圖2a)和nacit(圖2b)中nc變體的低ta溶出度(< 4%)。各種重金屬np在中性條件下的緩慢溶解得到了充分的證明，46╟50然而，在溶酶體ph下不到3%的總ta溶解是令人驚訝的。這清楚地證明了taox ncs在胞質(zhì)和溶酶體條件下的惰性。 使用icp-oes (n = 3，s.d. < 0.5)在4周內(nèi)從taox nc3和fitc-taox nc5中溶解ta于a.) pbs (ph 7.4)和b .)檸檬酸鈉(nacit，ph 5.5)中。 taox ncs的體外生存力為了評價(jià)各種taox ncs的細(xì)胞相容性，使用raw 264.7巨噬細(xì)胞和hek 293細(xì)胞在不同nc濃度下孵育24小時(shí)后進(jìn)行mtt細(xì)胞生存力測定。選擇nc1、nc2和nc4是因?yàn)樗鼈兪怯H水的，并且在細(xì)胞培養(yǎng)基中形成穩(wěn)定的懸浮液。在兩種細(xì)胞系中對所有三種nc類型測量了高達(dá)2.4 mg ml-1 ta的高細(xì)胞相容性(圖3a，b；esi +),可能得益于taox ncs的惰性和有限溶解。高細(xì)胞生存力與oh等人報(bào)道的ritc-taox納米粒子相匹配。 mtt細(xì)胞毒性測定將不同濃度的各種taox nc類型與培養(yǎng)的a.) raw 264.7巨噬細(xì)胞和b.) hek 293成纖維細(xì)胞各孵育24小時(shí)。 靜脈注射taox nc1后taox nc1的體內(nèi)ct成像測量高親水性taox nc1的體內(nèi)生物分布，并在分別以100 mm或200 mm ta濃度靜脈注射296 mg kg-1或592 mg kg-1 taox nc1后，在小鼠中進(jìn)行72小時(shí)的連續(xù)顯微ct成像。靜脈注射后，nc1在脈管系統(tǒng)中可見，并在循環(huán)中保持至少3小時(shí)，然后在24-72小時(shí)內(nèi)最終在肝臟和脾臟中蓄積(圖5)。脈管系統(tǒng)中的hu值在注射后立即達(dá)到最大，并隨時(shí)間而降低而肝臟和脾臟的濃度逐漸增加，分別在24小時(shí)和72小時(shí)達(dá)到峰值(圖6)。這些小鼠是健康的，在整個(gè)研究過程中沒有表現(xiàn)出任何副作用，如體重減輕、食欲不振或異常行為。 taox nc1在不同ta濃度的鹽水中的微型ct體模成像和b .)ct值作為taox nc1在鹽水中的ta濃度的函數(shù)的線性擬合(線性回歸方程:y = 5.69 x╟89.58，r2 = 0.9962)。 體內(nèi)x射線顯微ct成像。a .)在連續(xù)掃描時(shí)間點(diǎn)(基線0小時(shí)、注射后立即、注射后1、3、24、72小時(shí))單次快速給藥(217 l，592.3mg·kg-1，iv) 200 mm taox nc1的同一代表性balb/c小鼠的正交視圖(冠狀、矢狀、橫向)。hounsfield單位(hu)比例尺顯示腔靜脈(vc)、脾臟(s)、心臟(h)、肝臟(l)和門靜脈(pv)的高信號(hào)。 不同器官的ct增強(qiáng)掃描。在200 mm taox nc1的單次單次劑量(217 l，592.3mg·kg-1，iv)之前(基線)和之后，不同時(shí)間點(diǎn)不同器官的ct值(hu)。 接受單次大劑量鹽水(對照)、100 mm taox nc1 (220 l，296.2 mg kg-1鹽水)和200 mm taox nc1 (217 l，592.3 mg kg- 1鹽水)的小鼠的心臟、腎臟、肝臟、脾臟和膀胱的組織學(xué)變化，然后在注射后72小時(shí)進(jìn)行解剖。切片在h&e中染色，在光學(xué)顯微鏡下放大20倍觀察。箭頭指向肝臟和脾臟區(qū)域的腎梗塞和壞死區(qū)域。比例尺為50μm。 乳腺導(dǎo)管樹的活體x線顯微ct成像。a)在導(dǎo)管內(nèi)施用40升60毫米taox單次導(dǎo)管內(nèi)施用后的系列掃描時(shí)間點(diǎn)[基線、注射后立即(p.i .)、注射后2、24、96、144小時(shí)]的相同代表性fvb小鼠的腹部視圖(上圖)和3d重建hounsfield單位(hu)直方圖范圍標(biāo)準(zhǔn)化為0 hu到800 hu。每個(gè)注射導(dǎo)管樹的3d重建的顏色顯示了渲染對象的平均體素強(qiáng)度(hu)。 注射taox ncs后乳腺導(dǎo)管樹的成像。在這里，我們證明了taox nc1局部給藥的能力，并非常詳細(xì)地揭示了鼠導(dǎo)管樹的連續(xù)非吻合分支結(jié)構(gòu)。值得注意的是，使用taox nc1的小鼠的導(dǎo)管樹可視化明顯優(yōu)于使用isovue-300的小鼠，isovue-300是一種含碘的ca，在臨床上用于診斷導(dǎo)管造影。37雖然iso vue-300在注射后立即迅速擴(kuò)散出注射的導(dǎo)管樹，但37 taox nc1在導(dǎo)管樹內(nèi)保留超過5天，從而能夠?qū)φ麄�(gè)導(dǎo)管樹網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行重復(fù)成像(圖8)。 乳腺癌導(dǎo)管內(nèi)注射70%乙醇預(yù)防腫瘤形成的功效。37在乙醇中加入60 mm taox nc1使我們能夠在治療過程中觀察整個(gè)導(dǎo)管樹的充盈情況。在未來的研究中，taox nc1可用于高危個(gè)體局部消融預(yù)防性治療的臨床評估。 結(jié)論 極其親水的taox nc1在靜脈注射后在脈管系統(tǒng)中產(chǎn)生高體內(nèi)ct對比度，具有延長的血液循環(huán)時(shí)間，對于100 mm ta劑量沒有測量到顯著的毒性。taox nc1乳腺墊的導(dǎo)管內(nèi)注射提供了前所未有的嚙齒類動(dòng)物導(dǎo)管樹體內(nèi)成像。 |
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[考研] 本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調(diào)劑，任何專業(yè)都可以 +6 | 芝士雪baoo 2026-03-28 | 8/400 |
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[考研] 一志愿南京航空航天大學(xué)材料學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-28 | 3/150 |
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[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
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