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gentledragon金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助】求教肝微粒體體外代謝實驗問題 已有14人參與
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求教肝微粒體體外代謝實驗問題: 我從sigma訂購的鼠肝微粒體M9066,NADPH,按照文獻(xiàn)報道的方法試驗卻發(fā)現(xiàn)檢測不到代謝產(chǎn)物,底物量也不見減少。請同道中人指教,不勝感激! 為了鑒定烏頭堿的體外代謝產(chǎn)物,0.5ml反應(yīng)體系含150mM Tris-HCl 緩沖液(pH=7.4),5mM MgCl2, 1mg/ml 微粒體蛋白和40uM烏頭堿,反應(yīng)體系在37度預(yù)孵育3分鐘后,向體系中加入50uL NADPH(20mM/L)啟動反應(yīng),震蕩水浴上孵育60分鐘,而后向體系中加入4mL冰冷的二氯甲烷終止反應(yīng),渦旋震蕩后4500g離心10分鐘,取有機(jī)相3.5mL氮氣吹干,而后用250uL流動相溶解進(jìn)樣。 按此法操作后,并未像文獻(xiàn)中報道的那樣發(fā)生代謝,而后改進(jìn)緩沖液,即向緩沖液中加入甘油/EDTA/DTT,仍未見代謝發(fā)生,又有人說向體系中飽和氧氣會好些,依法做后仍未見代謝,遂求高人指教! |

鐵桿木蟲 (著名寫手)
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http://jpck.zju.edu.cn/ywfxjpkc/kcjj/lunw/17.pdf 你看一下這篇文章哈,因為我沒做過這方面的,具體也不是很清楚了! |
木蟲 (小有名氣)

金蟲 (正式寫手)

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