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gentledragon金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助】肝微粒體不代謝--急死人啦 已有5人參與
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求教肝微粒體體外代謝實驗問題： 我從sigma訂購的鼠肝微粒體M9066，NADPH，按照文獻報道的方法試驗卻發(fā)現(xiàn)檢測不到代謝產(chǎn)物，底物量也不見減少。請同道中人指教，不勝感激！ 為了鑒定烏頭堿的體外代謝產(chǎn)物，0.5ml反應(yīng)體系含150mM Tris-HCl 緩沖液（pH=7.4），5mM MgCl2， 1mg/ml 微粒體蛋白和40uM烏頭堿，反應(yīng)體系在37度預孵育3分鐘后，向體系中加入50uL NADPH（20mM/L）啟動反應(yīng)，震蕩水浴上孵育60分鐘，而后向體系中加入4mL冰冷的二氯甲烷終止反應(yīng)，渦旋震蕩后4500g離心10分鐘，取有機相3.5mL氮氣吹干，而后用250uL流動相溶解進樣。 按此法操作后，并未像文獻中報道的那樣發(fā)生代謝，而后改進緩沖液，即向緩沖液中加入甘油/EDTA/DTT，仍未見代謝發(fā)生，又有人說向體系中飽和氧氣會好些，依法做后仍未見代謝，遂求高人指教！ |
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