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【求助】流動(dòng)相添加法分離苯基琥珀酸對(duì)映體的問題 已有1人參與
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請(qǐng)教一下：HPLC分離苯基琥珀酸外消旋體，流動(dòng)相為：10mmol/l羥丙基β環(huán)糊精，20%乙腈，0.05%三氟乙酸，用三乙胺調(diào)pH=2.5，柱溫35度，流速0.6ml/min，波長(zhǎng)225nm，色譜柱為YMC的ODS C18（250*5）。由于實(shí)驗(yàn)的需要，苯基琥珀酸樣品的配制是這樣的：5mg樣品溶于20ml含有0.05mol/l的羥丙基β環(huán)糊精水溶液中，且該水溶液為0.1mol/l的磷酸鹽緩沖液。需要測(cè)定這個(gè)樣品中的R,S對(duì)映體HPLC分離情況。 結(jié)果對(duì)映體拆分效果較好（R保留時(shí)間短于S），但碰到一個(gè)現(xiàn)象，想不通：R的峰高要低于S峰高，且峰面積要少于S的面積，進(jìn)了好幾針都這樣。這是為什么？照道理兩個(gè)峰面積應(yīng)該一樣的啊，而且先出峰的R峰高應(yīng)該高于S的。 若把樣品溶解在甲醇中，就沒有上述現(xiàn)象。RS峰面積一致，峰高也正常。 這是為什么��？ |
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2樓2010-07-14 10:36:57
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