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yafang21新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】求助（SOS）分子標(biāo)記
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最近在做一個(gè)分子標(biāo)記，前面幾個(gè)樣PCR之后，PAGE的條帶非常好，但是后面幾個(gè)樣不知道什么原因，根本就沒(méi)有條帶。甚是郁悶！剛開始懷疑是PCR儀的問(wèn)題，但是在不同的PCR儀上的結(jié)果是一樣的，都沒(méi)有條帶；用瓊脂糖凝膠電泳判斷是否是DNA的問(wèn)題，但是發(fā)現(xiàn)DNA的條帶非常清楚，并不是這個(gè)問(wèn)題；PCR換了新的引物之后，還是沒(méi)有條帶；連之前做的有結(jié)果的樣現(xiàn)在都沒(méi)有條帶了，能看到的就是marker一條帶，說(shuō)明染色也不是問(wèn)題。現(xiàn)在真的很郁悶，哪位高手大俠能出面相救��？不甚感激！ [ Last edited by 1949stone on 2010-3-21 at 08:48 ] |
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2011-04-19 00:05:50
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2011-04-19 00:05:50
 我也出現(xiàn)過(guò)哦！篩選引物的時(shí)候還是可以的，引物篩選做完，開始進(jìn)行全部DNA聚丙烯酰胺凝膠的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)原來(lái)很好的引物，后來(lái)一條帶都沒(méi)有了。樣品是一樣加入的，就連模板還是一個(gè)管的，DD水也換了幾次，可郁悶啦！還是沒(méi)出來(lái)。后來(lái)不知道怎么了，又出來(lái)了，但是總覺(jué)得沒(méi)有篩引物的時(shí)候條帶多，清晰。 |
5樓2011-04-18 09:25:21
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yafang21(金幣+1):重新把該滅菌的都滅了，還是沒(méi)有條帶，傷心死了，不知道原因在哪里，指能換其他引物了 2010-03-23 23:09
| 我以前也遇到過(guò)這種情況，很惱人的。尤其篩選分子標(biāo)記這種重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，做著做著就出不來(lái)帶了。唯一的方法只能把實(shí)驗(yàn)停下來(lái)，一個(gè)成分一個(gè)成分的檢查，Taq，dNTP，引物，模板，甚至ddH2O都有可能出問(wèn)題，我有一次找了半天原因把水費(fèi)完了，重新拿了一瓶水，問(wèn)題就解決了————就這么簡(jiǎn)單。重要的是要有找問(wèn)題的耐心，，，呵呵 |
4樓2010-03-22 10:56:15
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