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04090023

金蟲(chóng) (小有名氣)

[交流] 【求助/交流】競(jìng)爭(zhēng)性ELISA 競(jìng)爭(zhēng)孔比稀釋孔OD值高 已有2人參與

待檢測(cè)物質(zhì)是小分子半抗原,將其與KLH、OVA等大分子載體蛋白偶聯(lián)后制備免疫抗原。之后制備單克隆抗體,但是最近在檢測(cè)抗體特異性的過(guò)程中遇到困難。用競(jìng)爭(zhēng)性ELISA方法,將小分子抗原與抗體孵育后檢測(cè)其OD值,同時(shí)做抗體相同稀釋倍數(shù)的對(duì)照,結(jié)果發(fā)現(xiàn)競(jìng)爭(zhēng)性的孔OD值居然比對(duì)照還高!真悲劇,實(shí)在是想不通,求各位大俠指點(diǎn)啊。!

求助求助。!

PS:同時(shí)做陰性孔和空白對(duì)照孔,OD值都在0.09以下,ELISA體系應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題吧~~~~
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gydgs033

金蟲(chóng) (小有名氣)


amisking(金幣+1): 2010-03-28 14:36
04090023(金幣+5): 2010-03-30 14:34
你做競(jìng)爭(zhēng)法為何陰性對(duì)照OD在0.09一下??,至少要2.0以上吧!
2樓2010-03-28 10:25:17
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gydgs033

金蟲(chóng) (小有名氣)

請(qǐng)問(wèn)競(jìng)爭(zhēng)OD和對(duì)照OD具體是多少??
3樓2010-03-28 10:29:59
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04090023

金蟲(chóng) (小有名氣)

引用回帖:
Originally posted by 04090023 at 2010-03-24 22:10:42:
待檢測(cè)物質(zhì)是小分子半抗原,將其與KLH、OVA等大分子載體蛋白偶聯(lián)后制備免疫抗原。之后制備單克隆抗體,但是最近在檢測(cè)抗體特異性的過(guò)程中遇到困難。用競(jìng)爭(zhēng)性ELISA方法,將小分子抗原與抗體孵育后檢測(cè)其OD值,同時(shí) ...

哦,我指的是空白孔在0.09以下。不好意思。對(duì)照樣的話,不同濃度的孔,差別不一樣,我現(xiàn)在想不明白為什么加了抗原的競(jìng)爭(zhēng)孔,比不加抗原的對(duì)照孔OD值還高呢?
4樓2010-03-30 14:29:32
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04090023

金蟲(chóng) (小有名氣)

引用回帖:
Originally posted by gydgs033 at 2010-03-28 10:25:17:
你做競(jìng)爭(zhēng)法為何陰性對(duì)照OD在0.09一下??,至少要2.0以上吧!

不好意思啊,我不太會(huì)用小木蟲(chóng)的。競(jìng)爭(zhēng)孔和對(duì)照孔的差值大概差值在0.3這樣子。希望您能指點(diǎn)!
5樓2010-03-30 14:33:16
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gydgs033

金蟲(chóng) (小有名氣)

你指得競(jìng)爭(zhēng)法是不是將偶聯(lián)的半抗原用1*CB PH=9。6 稀釋到合適的濃度  4度過(guò)夜包被在96孔板上,甩干,然后加封閉液 37度封閉2小時(shí) 甩干。再將將小分子抗原與抗體孵育后加入板孔檢測(cè)其OD值,同時(shí)做抗體相同稀釋倍數(shù)的對(duì)照??是這樣嗎??
6樓2010-04-25 11:33:59
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Annel

金蟲(chóng) (小有名氣)

你的競(jìng)爭(zhēng)抗原是用什么溶解的?對(duì)照孔用的什么?
7樓2010-04-26 11:07:47
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Annel

金蟲(chóng) (小有名氣)

我做競(jìng)爭(zhēng)也是很不穩(wěn)定,競(jìng)爭(zhēng)孔跟對(duì)照孔相差不大,有時(shí)候競(jìng)爭(zhēng)孔還比對(duì)照孔大,競(jìng)爭(zhēng)性很不好,我懷疑我的產(chǎn)生了橋抗體
8樓2010-04-26 11:09:28
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xiudan1225

金蟲(chóng) (正式寫手)


小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包,謝謝回帖
請(qǐng)問(wèn)樓主,競(jìng)爭(zhēng)孔OD值比非競(jìng)爭(zhēng)孔的OD值大的問(wèn)題解決了嗎?我在檢測(cè)培氟沙星的過(guò)程中也遇到了此類問(wèn)題,實(shí)在是太糾結(jié)了。。。
9樓2012-03-02 10:37:50
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yougking

鐵蟲(chóng) (初入文壇)


小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
引用回帖:
19928588樓: Originally posted by xiudan1225 at 2012-03-02 10:37:50
請(qǐng)問(wèn)樓主,競(jìng)爭(zhēng)孔OD值比非競(jìng)爭(zhēng)孔的OD值大的問(wèn)題解決了嗎?我在檢測(cè)培氟沙星的過(guò)程中也遇到了此類問(wèn)題,實(shí)在是太糾結(jié)了。。。

同求,競(jìng)爭(zhēng)孔OD值比非競(jìng)爭(zhēng)控OD值大的問(wèn)題,我在檢測(cè)一種抗生素的時(shí)候遇到了同樣的問(wèn)題,懷疑是不是高小分子濃度導(dǎo)致的,另外小分子稀釋液內(nèi)含有(<0.1%DMSO)
10樓2012-10-10 06:48:06
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