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frank345鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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【求助/交流】有關(guān)抑菌圈試驗(yàn)中菌種的濃度問(wèn)題！ 已有22人參與
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請(qǐng)教大家：我現(xiàn)在做抑菌圈試驗(yàn)，看有的文獻(xiàn)上說(shuō)，菌種活化后，要配菌懸液啥 的，比如用生理鹽水配成含菌數(shù)105 -106/ml的菌懸液怎么配呢？是不是通過(guò)濁度 和含菌量有一定的換算關(guān)系？有沒(méi)有簡(jiǎn)單易行的方法呢？急啊，謝謝大家了。  |
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小木蟲(chóng): 金幣+2, 帖子真精彩 2014-06-05 09:56:27
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小木蟲(chóng): 金幣+2, 帖子真精彩 2014-06-05 09:56:27
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有成熟的方法，舉例說(shuō)明，如下 我以前做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，使用的是金葡菌和大腸桿菌。就是先把金葡菌和大腸桿菌的菌種都先用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)一天，這里里面的活性菌的量會(huì)達(dá)到一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡，就是不斷的生長(zhǎng)和死亡。之后吸取1ML該培養(yǎng)液到100ml生理鹽水中，制成很濃的菌懸液。再然后就對(duì)該濃菌液進(jìn)行10倍遞增稀釋，一般稀釋到10-7到-8次就是每毫升100cfu左右的菌懸液了。 至于菌液的稀釋方法應(yīng)該是要自己掌握的，那就是手感還與你的培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度，菌種有關(guān)。建議進(jìn)行幾次菌液稀釋的平行實(shí)驗(yàn)并增強(qiáng)熟練度。掌握一個(gè)大概需要稀釋到幾次方。然后以后在真正做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，一般是實(shí)驗(yàn)和平板計(jì)數(shù)同時(shí)進(jìn)行的，實(shí)驗(yàn)結(jié)果出來(lái)了，平板計(jì)數(shù)的結(jié)果也就出來(lái)了。在根據(jù)平板計(jì)數(shù)的結(jié)果來(lái)計(jì)算抑菌的效果。 另外這個(gè)方法還有一個(gè)好處就是，配置的弄菌懸液是可以在4度左右的溫度下保存一周的，每次使用時(shí)每次稀釋并計(jì)數(shù)。不用每次都去培養(yǎng)，但是越到后面效果就越差，也就是活性菌的量越小，稀釋的倍數(shù)也就要相應(yīng)減小。低濃度的菌液是不能保存的，只能當(dāng)天使用。 呵呵，我這個(gè)方法是在藥廠做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)時(shí)用的，也用于藥物的抑菌驗(yàn)證，也就是限度實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證。你自己做實(shí)驗(yàn)用的話，因?yàn)榫N的不同及其他的因素，你是要自己先做驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的，菌種的培養(yǎng)基也根據(jù)你的菌種要求選擇，當(dāng)然驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)無(wú)論什么時(shí)候也都是必須的。該方法頗為有效，可做參考 。 |
3樓2010-04-08 16:14:38
unameder
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| 你用什么菌啊，曾經(jīng)用顯微鏡直接計(jì)數(shù)過(guò)，效果尚可。比較準(zhǔn)的是梯度稀釋涂布、傾倒吧，不過(guò)比較費(fèi)時(shí)間，還是提前確定生長(zhǎng)曲線什么的，確定培養(yǎng)條件如溫度轉(zhuǎn)速收菌時(shí)間，以后就用同樣的方法。如果要求較嚴(yán)格，那就像你所說(shuō)的，先確定濁度和菌密度的關(guān)系，每次用時(shí)測(cè)定濁度，查出菌密度，稀釋到目標(biāo)濃度。 |
2樓2010-04-08 16:12:18
zhaolw
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| 你可以將菌種活化后，挑去單菌落到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，如果是普通的哺乳動(dòng)物的菌一般不要超過(guò)24h，如果有恒溫?fù)u床時(shí)間要適當(dāng)縮短，濃度就能達(dá)到9-10次方。將菌液進(jìn)行計(jì)數(shù)，可以才用濁度計(jì)進(jìn)行計(jì)數(shù)，或者用比濁管，如果沒(méi)有上述工具可以進(jìn)行梯度稀釋，之后可以用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)，或者進(jìn)行平板涂布，進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。確定數(shù)量級(jí)后，可以采用培養(yǎng)液或者生理鹽水將菌液稀釋到你所需要的濃度。 |
4樓2010-04-08 16:43:06
dyszz
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