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風中搖曳木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】麻煩大家?guī)兔纯捶亲冃跃郾０冯娪緢D片 已有7人參與
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本蟲最近在進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，采用單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析技術(shù)，以尋找SNP。銀染結(jié)果不佳，目的條帶極不清晰，無法辨別結(jié)果。懇請大家指點： 1.PCR擴增片段為300bp，使用29：1聚丙烯酰胺原液，聚丙烯酰胺濃度為8%。使用電壓300v15min，130v電壓恒壓13小時，1倍TBE緩沖液。 2.上樣緩沖液為去離子甲酰胺：溴酚藍和二甲苯青=4：1，98°變性10min,冰浴5min。 3 .染色：雙蒸水漂洗兩次；0.1%AgNO3，輕搖15min，棄去反應(yīng)液，雙蒸水漂洗兩次；2%NaOH及2ml甲醛顯色。 中間的點樣孔為marker,不清楚底部的亮帶為何種片段？位置偏上的條帶為何模糊不清？最近的電泳結(jié)果真的十分苦惱。 不知道是否有研究SSCP的討論群及園友 ，懇請批評指點。謝謝大家的幫助！  [ Last edited by 風中搖曳 on 2010-4-24 at 13:15 ] |
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