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j2木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【求助/交流】繼續(xù)連接問(wèn)題 已有8人參與
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我用寶生物的連接試劑盒中solution1進(jìn)行載體和基因的連接，pmol比在1：5的樣子，連接3小時(shí)，由于其說(shuō)明書(shū)上說(shuō)連接產(chǎn)物可直接電泳，我取了5ul進(jìn)行了電泳，發(fā)現(xiàn)原載體3600bp，基因2000bp處無(wú)條帶，在5000bp以下出現(xiàn)了彌散帶。不知道是怎么回事？ 之前的轉(zhuǎn)化也沒(méi)篩到陽(yáng)性克隆。很困惑~~~想請(qǐng)教高手，該怎么辦？  marker:7000，5000，3500，2000，1000，500 |
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2樓2010-04-22 17:30:06
j2
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3樓2010-04-22 18:21:14
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
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4樓2010-04-23 19:50:25
zjzz
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5樓2010-04-24 07:05:46
6樓2010-04-24 11:45:08
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7樓2010-04-24 12:28:37
我也是同樣的問(wèn)題��？ 8樓2011-09-19 15:17:29
9樓2011-09-19 18:02:49
天使托
專家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
T.Shen
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
1949stone(MolEPI+1): 來(lái)也 2011-09-19 19:25:04
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
1949stone(MolEPI+1): 來(lái)也 2011-09-19 19:25:04
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像你這種連接產(chǎn)物直接電泳其實(shí)也可以，但是并不是完全可靠的。。。 按照你圖中的圖和你所描述的，有可能是連接上了！因?yàn)橹亟M載體一般比線性的要小一些； 你可以將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化一下，這樣質(zhì)粒拷貝數(shù)就會(huì)很高，然后提取質(zhì)粒酶切驗(yàn)證，也比較利于你進(jìn)行連接驗(yàn)證。。。。 祝好運(yùn)！ [ Last edited by 天使托 on 2011-9-19 at 19:05 ] |
10樓2011-09-19 19:04:07
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