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hall1998木蟲(chóng) (小有名氣)
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【求助】硅納米粒子洗滌及連接 已有3人參與
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各位大家好。我最近用反相微乳（油包水）制備了直徑在30-40nm的二氧化硅納米粒子，TEM顯示是球形的。但是，最近發(fā)現(xiàn)了一個(gè)問(wèn)題，就是在用丙酮破乳后，再用乙醇第一次洗滌的時(shí)候，離心后發(fā)現(xiàn)沉淀由白色變成了透明的，但是一超聲后，由變成白色懸浮液，請(qǐng)問(wèn)這是怎么回事啊？？ 再一問(wèn)題就是，二氧化硅納米粒子（合成同上法，表面氨基修飾）與DNA的連接問(wèn)題，我用的是EDC/NHS連接氨基修飾的DNA。做法如下：首先氨基修飾的NP懸浮在含有10%琥珀酸酐的DMF中，以使NP氨基轉(zhuǎn)化為羧基，離心洗滌后，用加入EDC/NHS，以及氨基DNA連接反應(yīng)3h。PS：EDC、NHS是新買的，DNA合成了2次。但是就是連不上。都連了幾個(gè)月了。請(qǐng)各位一定要幫幫我啊。 謝謝大家！ |
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NP氨基含量用熒光胺進(jìn)行了測(cè)定，有很強(qiáng)的熒光出現(xiàn)。在用琥珀酸酐處理后，再用熒光胺進(jìn)行了測(cè)定，這個(gè)時(shí)候，幾乎沒(méi)有熒光出現(xiàn)。 配方是：環(huán)己烷 7.5ml，正己醇 1.8ml，TX-100 1.77ml，20min后，加入水相480ul（水400ul+80ul 水溶性染料）反應(yīng)30min后，再加入100ul TEOS,60ul 氨水，反應(yīng)24h后，加入TEOS 50ul，APTES 20ul 反應(yīng)24。 用丙酮破乳后（沉淀是白色），沉淀用無(wú)水乙醇洗滌（離心后的沉淀是透明），用水洗滌，（懸浮液放置一段時(shí)間后再離心，此時(shí)的沉淀有可能變成白色）。 在進(jìn)行DNA連接時(shí)，會(huì)用到乙醇處理，所以每次處理后，都變成了透明的沉淀。 另外，DNA與NP連接，各位有好的經(jīng)驗(yàn)和技巧的，請(qǐng)給予指點(diǎn)，小弟我在這個(gè)問(wèn)題已經(jīng)折騰了快一年了。求各位了�。。。。�！ |
3樓2010-04-29 10:30:11
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