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zzw1221木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】熱激法和電轉(zhuǎn)化法 已有7人參與
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| 做一個(gè)100多kb 的克隆測(cè)序，利用transposon 插入的方法，插入序列不同的位點(diǎn)，準(zhǔn)備測(cè)序。用熱激法轉(zhuǎn)化做了兩次培養(yǎng)不出來(lái)，對(duì)于這么長(zhǎng)的測(cè)序是不是電轉(zhuǎn)化法好點(diǎn)，歡迎有經(jīng)驗(yàn)的同仁進(jìn)來(lái)討論，謝謝 |
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zzw1221
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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其實(shí)對(duì)這種大的一家族的基因包含各個(gè)位點(diǎn)分類(lèi)的，未知序列因?yàn)橹苯訙y(cè)序沒(méi)有引物，而且測(cè)的長(zhǎng)度有限，所以才有插入轉(zhuǎn)化子，在序列上可以插入不同的位點(diǎn)，根據(jù)然后根據(jù)插入轉(zhuǎn)化子的引物。加上相應(yīng)的載體固定引物進(jìn)行測(cè)序，這樣不同位點(diǎn)的插入得到不同的克隆，進(jìn)行測(cè)序，然后拼接和剪切，對(duì)有GAP的地方設(shè)計(jì)引物連接再測(cè)序，你挑去的克隆越多樣本越大測(cè)的越詳細(xì)，拼接越簡(jiǎn)單。原理是這樣的，是可以代替亞克隆的一種測(cè)序手段，相對(duì)高效吧，呵呵，大家交流交流不錯(cuò) |
10樓2010-05-01 02:39:17
yyydyjsgxb
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2010-04-30 00:50:18
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3樓2010-04-30 09:37:51
liyong1981 
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5樓2010-04-30 10:02:13
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