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aronxu鐵蟲 (初入文壇)
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一步法提取質(zhì)粒DNA
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一步法提取質(zhì)粒DNA主要用于鑒定陽性克隆。 主要步驟如下： 收集1.5mL菌體，徹底除去培養(yǎng)基； 加入50ulSTE緩沖液重懸菌體； 加入50ul酚：氯仿;異戊醇（25：24：1），混勻； 12000rpm離心5分鐘，取上清到另一離心管中； 加入NH4Ac至終濃度2M，并加入2倍體積的乙醇，混勻，室溫或冰上放置幾分鐘； 12000rpm離心5分鐘，棄上清，75%乙醇清沉淀； 沉淀干后，以水或TE緩沖液溶解，便可進(jìn)行酶切等操作。 這種方法提到的質(zhì)粒中，也有部分基因組DNA，但不影響酶切檢測鑒定，但是某些要求嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)不能采用這種方法。 |
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4樓2006-03-15 12:23:19
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