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韓麗麗新蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】內(nèi)切酶Bbvc1的問題 已有3人參與
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| 用Bbvc1和Asc1 雙切載體和片段，載體8K片段5K結(jié)果總是連不上，已經(jīng)重復(fù)了很多遍，是粘端連為什么總也連不上，是不是Bbvc1切后很難在連上啊？有用過這個酶的朋友可以分享一下你們的經(jīng)驗嗎？ |
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
plantaqp(金幣+3):歡迎交流 2010-05-16 02:30:30
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
plantaqp(金幣+3):歡迎交流 2010-05-16 02:30:30
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我用過Bbvc1這酶，這酶耽誤了我好長時間。。。 你怎么會用到這種稀有酶呢，最好是避開啊。 應(yīng)該用的也是NEB的吧，識別7堿基，酶切效率挺低的，切開后連接效率也很低。 估計你連不上很可能是載體上的酶切位點(diǎn)沒有切開，是不是轉(zhuǎn)化子都是空載體啊? 當(dāng)時我是利用了載體上另外一個酶切位點(diǎn)，和Bbvc1以及另外一種酶做的三酶切，保證Bbvc1酶切位點(diǎn)是完全切開，然后做三片段連接的，一次就成功了。。。 可能說的不太清楚，你如果還有什么疑問，隨時解答。。。 |
2樓2010-05-15 16:14:34
韓麗麗
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3樓2010-05-15 22:47:05
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4樓2010-05-16 01:24:50
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5樓2010-05-16 12:39:19
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