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ottolzm木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】求助，各位大俠一個(gè)問題？ 已有1人參與
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本人是做基因工程菌的，得到一段編碼酶T的基因Sprt(文獻(xiàn)報(bào)道)，之后同數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)在NCBI中有一株鏈霉菌A，其名稱和實(shí)驗(yàn)室保留一株鏈霉菌B一模一樣（只是編號(hào)差別），在鏈霉菌A中存在一段編碼酶T的相似基因C(798bp，同Sprt相似度78.9%)及編碼酶T相似蛋白酶的基因D（831bp，同Sprt相似度44.4%）。 之后我對(duì)實(shí)驗(yàn)室保留的鏈霉菌測(cè)定了酶T的活性(采用酶T的專一性底物)，測(cè)到了酶活（酶學(xué)動(dòng)力曲線很標(biāo)準(zhǔn)，一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程線性值為0.9998），隨后我根據(jù)鏈霉菌A中的基因C和基因D設(shè)計(jì)引物，設(shè)想從實(shí)驗(yàn)室保存的鏈霉菌B中對(duì)C和D基因進(jìn)行PCR，之前在論壇內(nèi)請(qǐng)教了若干好心人，今天進(jìn)行了PCR(DNA taq是BBI的DNA Taq 聚合酶)，電泳之后發(fā)現(xiàn)PCR條帶大小不對(duì)，本來(lái)是798bp和831bp，電泳條帶卻在1500bp處很亮。想請(qǐng)教大家，首先，一。我這樣的思路是否有問題(因?yàn)樵阪溍咕鶥中存在一段酶基因TG，已經(jīng)測(cè)序，當(dāng)將其同鏈霉菌A的全基因組序列進(jìn)行比對(duì)時(shí)，卻沒有相似的序列顯示，而且推斷的蛋白質(zhì)中也沒有TGase)? 二。如果出現(xiàn)了問題，是否引物有問題，或者是別的原因？三。如果換一種PCR聚合酶是否會(huì)對(duì)結(jié)果有所改變？ 謝謝大家的無(wú)私幫助，謝謝大家�。�！ |
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ottolzm
木蟲 (正式寫手)
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2樓2010-05-20 14:33:10
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