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happy8506新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】DNase 處理 RNA 的具體步驟（不用試劑盒） 已有4人參與
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| 請(qǐng)教一下用DNase 處理 RNA ，除去DNA的詳細(xì)步驟，最好是不用試劑盒的。謝謝！ |
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zhwenxing
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
尛森蟲(chóng)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):歡迎多多交流~~ 2010-05-19 18:51:58
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1、首先要打開(kāi)RNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)。70-72℃10min后立刻冰冷。 2、體系有大有小根據(jù)說(shuō)明書(shū)來(lái)就可以了。 3、特別注意DNAse的濃度！也就是單位數(shù)，一般稀釋后使用，1/1000有時(shí)候就足夠啦。 4、過(guò)柱子法或者沉淀法回收RNA，肯定會(huì)有不少損失的~多準(zhǔn)備點(diǎn)RNA哈~ 祝福好運(yùn)！ |
3樓2010-05-19 17:49:12
holyala
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lstt09nk(金幣+3):歡迎多多交流~~ 2010-05-19 18:52:29
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1) 取10μgRNA樣品置于RNase–free的EP管中，進(jìn)行DNA消化。一般采用20μL體系。 RNA 10 μg DEPC水 n μL 10×DNase I Buffer 2 μL DNase I 2 μL Total volume 20 μL 2）37 ℃，反應(yīng)10min。 3）加入2μL 1mM EDTA，75 ℃變性10min，冰上冷卻。 4）補(bǔ)水至100μL（78μL DEPC–H2O），加入10μL 3M NaAC，2μL糖原，混勻后加入2.5倍體積的無(wú)水乙醇，再次混勻，-80 ℃靜置30min沉淀RNA，13000 rpm 4 ℃離心20min。70%乙醇（DEPC–H2O配制）洗滌并13000 rpm離心5min。稍微晾干后用DEPC–水溶解沉淀。 |
2樓2010-05-19 17:25:04
happy8506
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4樓2010-05-19 18:15:03
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5樓2010-05-19 18:17:12
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