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[交流] 【求助】菜鳥(niǎo)一問(wèn)：用熒光分光光度計(jì)如何定量？已有9人參與

我使用的儀器型號(hào)：Perkin－Elmer LS－５ fluorescence spectrophotometer

經(jīng)過(guò)激發(fā)和發(fā)射掃描后，我確定了激發(fā)和發(fā)射的最高峰對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)值，我想用不同濃度的溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以用峰高來(lái)確定標(biāo)準(zhǔn)值嗎？又如何確定？是不是只要在激發(fā)和發(fā)射最大值時(shí)候的讀數(shù)就是這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值？

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1樓 2010-05-27 00:15:53

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annietop(金幣+5):謝謝回復(fù)！ 2010-05-29 13:50:15

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5樓2010-05-28 08:43:43

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annietop(金幣+3):謝謝回復(fù)！ 2010-05-29 13:46:05

通常是通過(guò)發(fā)射光譜進(jìn)行定量，就是固定激發(fā)波長(zhǎng)，掃描不同濃度溶液的發(fā)射光譜，以其峰高處對(duì)應(yīng)的相對(duì)熒光強(qiáng)度與濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在測(cè)定未知物的熒光強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對(duì)應(yīng)濃度。

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2樓2010-05-27 16:40:37

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May2010

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annietop(金幣+1):謝謝！ 2010-05-29 13:46:25

恩。沒(méi)錯(cuò)的。就是用2樓的辦法，先配系列濃度的溶液，然后做出標(biāo)準(zhǔn)曲線或者回歸方程。然后再測(cè)待測(cè)溶液的熒光強(qiáng)度，把強(qiáng)度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中求濃度。

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3樓2010-05-27 21:45:02

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annietop(金幣+2):謝謝回復(fù)！ 2010-05-29 13:50:28

同意樓上的說(shuō)法，不過(guò)需要注意的是濃度不能太大以杜絕熒光淬滅等的影響。

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6樓2010-05-28 08:50:34

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annietop(金幣+5):多謝詳細(xì)解答！ 2010-05-29 13:52:10

高濃度時(shí)溶液黏度增大，分子碰撞可能增大，激發(fā)態(tài)分子可能因?yàn)榕鲎捕ツ芰慷祷鼗鶓B(tài)，因而熒光強(qiáng)度可能降低。并且高濃度時(shí)可能有自吸收作用，或者生成激基禘和物甚至基態(tài)二聚體。

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9樓2010-05-29 08:24:00

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annietop(金幣+5):謝謝解釋～ 2010-05-30 00:50:57

引用回帖:

Originally posted by annietop at 2010-05-29 13:51:01:

什么是神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法��？

神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法就是模擬人腦結(jié)構(gòu)處理信息的一種方法，因?yàn)闊晒鈴?qiáng)度通常和濃度之間是非線性的關(guān)系，而神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)特別適合處理這種非線性的信息�？梢陨暇W(wǎng)搜一下文獻(xiàn)，這方面的東西還是挺多的。

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12樓2010-05-29 20:29:41

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引用回帖:

Originally posted by cxj792190 at 2010-05-27 16:40:37:
通常是通過(guò)發(fā)射光譜進(jìn)行定量，就是固定激發(fā)波長(zhǎng)，掃描不同濃度溶液的發(fā)射光譜，以其峰高處對(duì)應(yīng)的相對(duì)熒光強(qiáng)度與濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在測(cè)定未知物的熒光強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對(duì)應(yīng)濃度。

還有別的方法嗎？我一開(kāi)始就是按照你這種方法做的，但是根本沒(méi)有什么線性關(guān)系，據(jù)說(shuō)有一種方法是找到最大激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)，此時(shí)的熒光讀數(shù)與對(duì)應(yīng)濃度做曲線，大家再提個(gè)意見(jiàn)把

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4樓2010-05-27 23:53:51

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annietop(金幣+2):謝謝！ 2010-05-30 00:50:27

測(cè)不同濃度溶液的發(fā)射譜或者激發(fā)譜，用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的方法

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7樓2010-05-28 18:43:57

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annietop(金幣+1):謝謝！ 2010-05-29 13:52:25

引用回帖:

Originally posted by dx109 at 2010-05-28 08:50:34:
同意樓上的說(shuō)法，不過(guò)需要注意的是濃度不能太大以杜絕熒光淬滅等的影響。

很正確，不過(guò)為什么濃度高會(huì)猝滅？能解釋下不

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8樓2010-05-28 22:18:58

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Originally posted by cxj792190 at 2010-05-28 08:43:43:
最大激發(fā)與最大發(fā)射波長(zhǎng)的掃描方法：可先選擇將紫外吸收波長(zhǎng)作為激發(fā)波長(zhǎng)，掃描其發(fā)射光譜，以其最大吸收處作發(fā)射波長(zhǎng)，再固定掃描得到的發(fā)射波長(zhǎng)掃描激發(fā)光譜，可能又會(huì)得到一最大激發(fā)波長(zhǎng)，然后再做發(fā)射光譜，再 ...

那我看看去，如果有這一項(xiàng)功能還能驗(yàn)證一下。你說(shuō)的這個(gè)方法和2樓的方法是一樣的，還有沒(méi)有別的方法？

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10樓2010-05-29 13:49:29

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