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chunmeiyang銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】有關(guān)碳酐酶的問(wèn)題，急！急！急！ 已有1人參與
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| 請(qǐng)問(wèn)各位，你們純化帶GST標(biāo)簽的酶時(shí)，之后有沒(méi)有將GST標(biāo)簽切除�。慷际窃趺辞械陌�？我正在純化碳酐酶，上面帶的就是這個(gè)標(biāo)簽，GST標(biāo)簽比較大，對(duì)我的后續(xù)試驗(yàn)可能會(huì)有影響，想將其切除，但用凝血酶試過(guò)幾次，都沒(méi)成功，各位高人，幫幫忙啊~~ |
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月月大可
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-06-23 14:31:46
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-06-23 14:31:46
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你得明確你使用的是那個(gè)載體才能知道用哪個(gè)酶去切�。。。。。。�！ pGEX系列的載體中切出GST標(biāo)簽的有Thrombin的，還有PreScission Protease、Factor Xa .我們組使用的是PP切，很容易就切掉了。 載體圖譜：http://www.sgc.utoronto.ca/SGC-WebPages/Vector_PDF/pGEX-6P-2.pdf 另外我使用的Thrombin切出His tag，感覺(jué)不是很難。我的酶都是十年前留下的冷凍干粉，也不知道能不能用了。偶直接加生理鹽水溶解后就那么用了，效果還相當(dāng)不錯(cuò)。4℃過(guò)夜酶切的很好。 Thrombin作用的時(shí)候要保證pH在7-8，效果會(huì)比較好，150mM NaCl，2.5mM CaCl2，外加千分之一的β-ME。 [ Last edited by 月月大可 on 2010-6-23 at 13:13 ] |
2樓2010-06-23 13:12:15
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