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chuchengliang銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】有沒有做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的朋友進(jìn)來給給建議 已有5人參與
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 CHO細(xì)胞培養(yǎng)的過程中出現(xiàn)的問題：單克隆篩選出來的細(xì)胞，經(jīng)過一段時(shí)間的搖瓶培養(yǎng)穩(wěn)定后逐漸轉(zhuǎn)到另一種培養(yǎng)基， 待原培養(yǎng)基幾乎被替代后，調(diào)整細(xì)胞密度，培養(yǎng)到對(duì)數(shù)期，分成兩份，一部分作生長(zhǎng)曲線，另一部分作為備份 通過生長(zhǎng)曲線反映出細(xì)胞的活力和密度都非常高 作為備份的細(xì)胞培養(yǎng)到對(duì)數(shù)期后重復(fù)上述操作，一部分備份，另一部分作生長(zhǎng)曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞的分裂減緩，密度達(dá)不到原來的高度 同樣下面的一批的密度更低，活力維持的時(shí)間更短，測(cè)定培養(yǎng)基的代謝產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞的糖耗降低，乳酸積累較高，pH低。 不知道是什么原因，希望有高人能給出指點(diǎn)，不勝感激。 |
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至于是哪個(gè)試劑導(dǎo)致的出現(xiàn)這種情況還是需要你自己尋找原因的。但是從描述上我只能判斷后來培養(yǎng)的細(xì)胞增殖慢了。顯然就導(dǎo)致了生長(zhǎng)曲線中對(duì)數(shù)期變短。另外耗糖量增加但是酸變多，說明細(xì)胞只是“吃沒有長(zhǎng)個(gè)”。你說的活力好只是肉眼判斷的，至于細(xì)胞內(nèi)代謝你只能用指標(biāo)說明，指標(biāo)的結(jié)果現(xiàn)在他的活力并不好。 我建議你可以測(cè)下不同密度下接種看是不是還是如此現(xiàn)象？另外培養(yǎng)基一定要保證都是一樣的新鮮。有些細(xì)胞是比較“挑食”的。 |
8樓2010-06-29 10:46:37
qsx04152006
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9樓2010-06-29 12:13:01
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