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yxwb-234金蟲(chóng) (小有名氣)
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【求助】請(qǐng)教化學(xué)的哥哥姐姐弟弟妹妹們 已有1人參與
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| 我用福林-酚法測(cè)蛋白酶的酶活，方法都有現(xiàn)成的，但是我買(mǎi)回來(lái)的福林-酚試劑卻分為福林試劑甲，福林試劑乙，而書(shū)上寫(xiě)的就是加入福林試劑多少毫升，怎么辦啊，著急啊。請(qǐng)問(wèn)化學(xué)的gg,mm們，是不是還有一種福林-酚試劑混合液啊，不分甲液乙液的那種？ |
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2樓2010-07-27 21:22:45
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
zeng1986kai(金幣+3): 謝謝應(yīng)助！ 2011-10-09 09:12:55
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zeng1986kai(金幣+3): 謝謝應(yīng)助！ 2011-10-09 09:12:55
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Folin-酚試劑使用說(shuō)明書(shū) 1．Folin—酚試劑甲： 溶液I: 2g無(wú)水碳酸鈉溶于100ml 0.2mol/L 氫氧化鈉中（已配置成5X）,用時(shí)稀釋5倍 溶液II: 0.5g五水硫酸銅溶于100ml 1%酒石酸鉀鈉（或酒石酸鈉）溶液。 將稀釋后的溶液I與溶液II,以50：1的比例混合，混合后即為Folin-酚試劑甲，此試劑只能用一天，過(guò)期失效。 2．Folin—酚試劑乙： 原液濃度為2moL/L，使用前需稀釋一倍，用多少稀釋多少。使其最后濃度為1moL/L， 此為Folin—酚試劑乙應(yīng)用液。Folin—酚試劑乙原液平時(shí)應(yīng)密封貯存于4℃冰箱中避光保存。 3．操作方法： 1) 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作： 取14只試管分成兩組，按下表順序加入試劑，混勻，于室溫℃放置10分鐘。再加入0.5毫升試劑乙，立即搖勻，在室溫放置30分鐘，然后于500nm處比色。測(cè)定光密度值。取兩組測(cè)定的平均值， 以蛋白質(zhì)濃度為橫座標(biāo),光密度值為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)值為定量的依據(jù)。 試劑/管號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 BSA/ml(250ug/ml) 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸餾水/ml 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 試劑甲/ml 5 5 5 5 5 5 5 試劑乙/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 2) 樣品測(cè)定： 1、取1毫升樣品溶液（約合20-250微克多肽或蛋白質(zhì)）加入5毫升試劑甲混勻，于室溫放置10分鐘， 2、加0.5毫升試劑乙(Folin—酚)；立即搖勻，于室溫保溫30分鐘：然后于500nm處比色，以1毫升水代替樣品作空白對(duì)照。測(cè)定后，可從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中查出未知樣品的濃度。 若用0.5厘米光程的比色杯進(jìn)行比色，可按下面方法進(jìn)行操作；取0.2毫升樣品溶液（約含5—100微克多肽或蛋白質(zhì)），加入1毫升試劑甲（可選用 0.3-0.5厘米直經(jīng)的小試管）混勻，10分鐘后，再加入0.1毫升試劑乙，立即混勻，30分鐘后比色。一般來(lái)說(shuō)，若多肽或蛋白質(zhì)濃渡在2-25微克，測(cè)波長(zhǎng)755nm，而25微克以上則采用500nm比色為宜。 |
3樓2011-05-18 16:07:39
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