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entomology557鐵桿木蟲 (知名作家)
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[交流]
【求助/交流】純化的sod1活性測定 已有3人參與
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已經(jīng)克隆、表達(dá)并純化了一種蟲子的sod1基因（銅芯sod），目前表達(dá)純化的蛋白是可溶蛋白，想測定其活性，四處找了一下，現(xiàn)用南京建成的試劑盒進(jìn)行檢測。 但現(xiàn)在的檢測結(jié)果是，表達(dá)出來的蛋白活性很低，我懷疑原因是不是這個sod需要更多的銅芯離子，因?yàn)槲以谡T導(dǎo)培養(yǎng)的時候沒有額外加入銅芯離子（此蛋白需要銅芯離子的結(jié)合才能有活性）。但我查閱了很多外文文獻(xiàn)，也沒見大家都在實(shí)驗(yàn)方法中提出要相應(yīng)的加入銅芯離子，并且文獻(xiàn)中最后的酶活測定方法也都很含糊。 不知道有沒有大俠熟悉這個蛋白，純化后用什么方法（最好是簡單、方便的試劑盒）測此蛋白的活性最好。另外lb培養(yǎng)基中本身含有的銅芯離子是否能滿足此蛋白的需求，如果不夠的話需要加多少額外的金屬離子呢？不勝感激！ |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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4樓2021-11-03 14:58:11
scelab
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2樓2010-07-06 00:21:45
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