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【求助/交流】SOS！轉(zhuǎn)基因小鼠制備中的遇到的問(wèn)題 已有1人參與
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SOS！ 本人從事小鼠轉(zhuǎn)基因研究，目前在實(shí)驗(yàn)中遇到一些棘手的問(wèn)題。論壇里是否有從事轉(zhuǎn)基因小鼠研究的大蝦？是否有從事小鼠胚胎發(fā)育研究的大蝦？是否有從事微生物研究的大蝦？請(qǐng)大家?guī)蛶兔Α?br /> 問(wèn)題描述如下： 做轉(zhuǎn)基因小鼠研制需要從超排的母鼠體內(nèi)取受精卵，然后再將制備好的DNA顯微注射到小鼠受精卵的原核中。我以前取的卵質(zhì)量都還比較好，但最近取的小鼠受精卵總感覺(jué)質(zhì)量不佳。用倒置顯微鏡（400倍）觀察卵，在透明帶與細(xì)胞膜之間，有一些極小的黑點(diǎn)在運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)速度不快，但確實(shí)有，感覺(jué)像細(xì)菌。此時(shí)觀察培養(yǎng)卵的液滴，無(wú)黑點(diǎn)運(yùn)動(dòng)，培養(yǎng)液清亮無(wú)污染。 這樣的卵經(jīng)過(guò)顯微注射后，在第二天觀察，有些卵內(nèi)黑點(diǎn)明顯增多。有些經(jīng)過(guò)2-3天培養(yǎng)后觀察，卵內(nèi)（透明帶與卵的分裂球之間）可見(jiàn)大量黑點(diǎn)運(yùn)動(dòng)，判斷應(yīng)該是大量細(xì)菌繁殖。卵已經(jīng)死亡。 但此時(shí)在觀察同批的培養(yǎng)液，仍清亮，無(wú)黑點(diǎn)（無(wú)細(xì)菌污染），感覺(jué)卵內(nèi)的細(xì)菌不像是因污染的培養(yǎng)液而進(jìn)入透明帶。 本人非常困惑，小鼠的受精卵由于是由正常的母鼠產(chǎn)生的，其體內(nèi)有一套良好的免疫系統(tǒng)，應(yīng)該不會(huì)有細(xì)菌會(huì)在卵子形成早期就侵入受精卵內(nèi)，而且，這些卵外層的透明帶完好無(wú)破損，就算培養(yǎng)液有污染，一般細(xì)菌也很難侵入到透明帶之內(nèi)。 這些細(xì)菌從何而來(lái)？由何產(chǎn)生？是何種類(lèi)？急盼高人指點(diǎn)迷津啊~~~！ 附：我們的實(shí)驗(yàn)室設(shè)置在萬(wàn)級(jí)凈化的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，培養(yǎng)液制作等操作在超凈臺(tái)中完成，操作過(guò)程很小心。實(shí)在非常困惑這些細(xì)菌的來(lái)歷啊…… |
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scelab(金幣+10):熱心蟲(chóng)友，歡迎多來(lái)交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-11 23:54:22
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首先有一點(diǎn)是確定的，體內(nèi)取的受精卵絕不可能在卵周隙中長(zhǎng)有細(xì)菌。因此，說(shuō)是細(xì)菌有些不大可能，可排除。 沒(méi)見(jiàn)到實(shí)際的圖像，不好做出判斷，只能推測(cè)。 有時(shí)卵周隙會(huì)有極體的碎片，但與你的描述明顯不符，可排除。如果你是在扎前看到，并且每個(gè)胚胎都這樣，那最可能的是操作不當(dāng)導(dǎo)致受精卵崩解了（但受精卵比卵母細(xì)胞結(jié)實(shí)的多，一般的操作都能耐受）。如果你是在扎后看到，最大的可能是膜已破，胞質(zhì)流出了，這樣的胚胎有時(shí)可維持形態(tài)大約20-30min，然后崩解。你提到這些胚胎還可以卵裂，是很奇怪的，我很懷疑那是碎片，有清晰的圖發(fā)幾個(gè)上來(lái)嗎？ 如果再采到這樣的受精卵，lz可以直接培養(yǎng)，即使細(xì)菌污染，胚胎也能發(fā)育到2細(xì)胞的，如果培養(yǎng)后不能得到卵裂球邊緣輪廓清晰的2細(xì)胞胚胎，那就是受精卵崩解了。反之，那就只可能是第三個(gè)原因了。 |
2樓2010-10-11 22:08:23
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