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【求助/交流】雙雜交探針與溶解曲線分析 已有1人參與
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大家都知道，在熒光定量PCR中使用飽和熒光染料可對PCR產(chǎn)物進行高分辨率溶解曲線分析，其中的原理是比較簡單的，較為容易理解。 同時在定量PCR中也可使用雙雜交探針即是有兩條探針，上游探針的3`端標記供體熒光基團，相鄰下游探針的5`端標記Red 640受體熒光基團。當復性時，兩探針同時結合在模板上，供體基團和Red640受體基團緊密相鄰（距離1—5bp），激發(fā)供體產(chǎn)生的熒光能量被Red640基團吸收，使得檢測探頭可以檢測到Red640發(fā)出波長為640的熒光。當變性時，兩探針游離，兩基團距離遠，不能檢測到640波長的熒光。 雙雜交探針也可用于定量PCR后的溶解曲線分析，但對其中的原理一直不太了解，其是通過檢測3‘端的熒光基團還是640熒光？檢測得到的Tm值是完整DNA片段的還是上游探針結合片段或下游探針結合片段的Tm值？望高手指點！ [ Last edited by wdy0330 on 2010-7-20 at 10:42 ] |
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