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ltakashi銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】連T載體后，轉(zhuǎn)化不成功！請(qǐng)各位同仁幫忙分析下！有圖有數(shù)據(jù) 已有15人參與
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我的目的片段1800左右，連了5次T，轉(zhuǎn)化后，板上沒(méi)有菌落！ 昨天和一個(gè)師姐又做了一次轉(zhuǎn)化，今早還是沒(méi)長(zhǎng)，但是她的板長(zhǎng)啦！ 我的目的回收條帶，如圖！我只切了很亮的部分，下面拖尾的部分沒(méi)切！  回收后，測(cè)了DNA含量！ A260/A280=1.91, 含量31.7ng/微升 用的是TAKARA公司的PMD18-T試劑盒 我用了三個(gè)連接體系是： 一個(gè)是：solution I: 5微升，片段：4微升 ，T載體：1 微升 算出來(lái)的T載體摩爾數(shù)與插入片段載體摩爾數(shù)約是：1：3 一個(gè)是：solution I: 5微升，片段：5微升 ，T載體：1 微升 算出來(lái)的T載體摩爾數(shù)與插入片段載體摩爾數(shù)約是：1：4 一個(gè)是：solution I: 5微升，片段：5微升 ，T載體：1 微升 算出來(lái)的T載體摩爾數(shù)與插入片段載體摩爾數(shù)約是：1：5 連接時(shí)間是：16個(gè)小時(shí)左右 另外感受態(tài)是當(dāng)天做的！ 不存在問(wèn)題！ 請(qǐng)各位幫我分析下，哪里出了問(wèn)題！ [ Last edited by ltakashi on 2010-7-24 at 09:37 ] |
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