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ganggang6667銀蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】支原體檢測 已有11人參與
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最近養(yǎng)細(xì)胞發(fā)現(xiàn)有支原體感染，誰有快速檢測支原體的方法？分享一下�。� 謝謝~~~~ |
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lstt09nk(金幣+4):很詳細(xì)，新小牛人要加油哦~~呵呵 2010-07-26 17:03:12
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對于支原體污染的細(xì)胞，可以采取補救措施： 1 抗生素排除法：可以用5-10倍于常用量的沖擊法，加入高濃度抗生素后作用24-48小時，再換入常規(guī)培養(yǎng)液，有時可能有效。推薦用量：慶大霉素 200ug/ml ,四環(huán)素10ug/ml ，卡那霉素50ug/ml 。對于支原體污染抗生素應(yīng)用，預(yù)防性應(yīng)用比污染后使用好。 2 加溫除菌：根據(jù)支原體耐熱性能差的特點。將受支原體污染的細(xì)胞置于41度中作用5-10小時可以殺滅支原體。但由于41度對培養(yǎng)細(xì)胞本身也有較大的影響，故處理前，應(yīng)先進(jìn)行預(yù)試驗，確定出最大限度殺傷支原體而對細(xì)胞影響較小的處理時間 支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。 組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴(yán)格實驗操作；細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后，特別是重要的細(xì)胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁，一般來講，對作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素，如 -內(nèi)酰胺類、萬古霉素等完全不敏感；對多粘菌素（polymycin）、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些氟喹諾酮；其他類抗生素如氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 InvivoGen公司研究開發(fā)的新一代支原體抗生素M-Plasmocin能有效地殺滅支原體，不影響細(xì)胞本身的代謝，并且用M-Plasmocin處理過的培養(yǎng)細(xì)胞，不會重新感染支原體。 紅霉素有效，而且不影響細(xì)胞生長。細(xì)胞剛開始被支原體污染，細(xì)胞生長極為緩慢，而且狀態(tài)不好，細(xì)胞之間及底部總有一些亮晶晶的顆粒狀物質(zhì)，換液后好些，但過2天又會增多，培養(yǎng)液清亮，嚴(yán)重時象一層細(xì)沙鋪在瓶底。剛開始以為是消化過頭引起的細(xì)胞的碎片和細(xì)胞內(nèi)的顆粒，后來發(fā)現(xiàn)與胰酶消化無關(guān)。使用紅霉素（就在醫(yī)院的門診購買，很便宜）后這種現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)，背景干凈，細(xì)胞生長很快，狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，但好像紅霉素不能完全根治支原體感染，停藥后一段時間可以復(fù)發(fā)，熱滅活可以試試，41度10個小時，可以殺死支原體，是一種比較簡單的方法，對細(xì)胞損傷不大。 |
10樓2010-07-26 16:28:10
三磷酸腺苷
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5樓2010-07-26 14:50:22
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7樓2010-07-26 14:59:17
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8樓2010-07-26 15:01:39
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