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[交流]
【求助/交流】4% 多聚甲醛作為固定液的具體使用方法 已有5人參與
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24孔板中放入爬片后，加入細(xì)胞懸液，藥物或者熒光物質(zhì)處理； 24小時(shí)后，吸掉培養(yǎng)液，用PBS洗一遍！ 然后就用4% 多聚甲醛固定嗎？ 還是先將小片取出放到載玻片上，然后再用4% 多聚甲醛固定？ 我是要做爬片（一定要放到載玻片上的）用熒光顯微鏡觀察FITC。 有這方面經(jīng)驗(yàn)的多多指教！非常感謝。 同時(shí)拿我上次做實(shí)驗(yàn)的過(guò)程給大家看看 上次實(shí)驗(yàn)非常失敗，白忙活了兩天 小片放入24孔板，細(xì)胞常規(guī)傳代操作，每孔接種細(xì)胞2萬(wàn)個(gè) 加入藥物及熒光物質(zhì)等處理細(xì)胞（特殊處理，在細(xì)胞懸液狀態(tài)下處理的細(xì)胞） 24小時(shí)后細(xì)胞貼壁，吸掉培養(yǎng)液，PBS洗了3遍 取出小片入到載玻片就觀察了。 沒(méi)有使用4% 多聚甲醛固定液 取出小片到載玻片前用PBS洗了三遍，每遍只用了幾秒時(shí)間 結(jié)果觀察發(fā)現(xiàn)本底熒光較強(qiáng)，細(xì)胞數(shù)量比開(kāi)始觀察到的貼壁量明顯減少 結(jié)果明顯不能反應(yīng)問(wèn)題 |
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2樓2010-07-26 19:10:44
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