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cocofeifei金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】怎樣創(chuàng)建植物組織培養(yǎng)的無菌環(huán)境 已有19人參與
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剛剛開始研究生階段的研究，然后老板讓做一個(gè)完全的方向的研究。植物組織培養(yǎng)是研究的基礎(chǔ)，由于本人本科階段是做化工的，所以沒有任何基礎(chǔ)�，F(xiàn)在想要問各位筒子一個(gè)問題，就是無菌環(huán)境的創(chuàng)造，我先說一下我知道的哈： 1、培養(yǎng)基培養(yǎng)皿高溫蒸汽滅菌。 2、超凈臺(tái)紫外滅菌30min，這時(shí)候要把不怕被紫外傷害的所有物品全部放入超凈工作臺(tái)滅菌。 3、把待培養(yǎng)的植物材料外噴75%的酒精后放入超凈臺(tái)，手也要噴酒精才能進(jìn)入超凈臺(tái)工作。 4、要一直開無菌空氣扇。 問題是：如果我的植物材料是用封口膜封上的，那進(jìn)噴酒精可以殺菌嗎？因?yàn)榉饪谀蓪铀芰现g也會(huì)有細(xì)菌存在的�。� 還有就是，在配置固體培養(yǎng)基的時(shí)候，滅完菌后，要把培養(yǎng)基搖一搖再讓其冷卻嗎？ 操作的時(shí)候手不允許在任何敞口容器上方經(jīng)過，但是經(jīng)過真的很容易染菌嗎？ 請(qǐng)大家不吝賜教！謝謝！！ |
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共享一下我的資料： 無菌操作 植物組織培養(yǎng)要求嚴(yán)格的無菌條件及無菌操作技術(shù)。無菌操作技術(shù)如下。 一、接種室的無菌技術(shù) 無菌操作室或接種室除用甲醛和高錳酸鉀按2比1的比例定期熏蒸滅菌，在實(shí)驗(yàn)室用甲醛和高錳酸鉀封閉消毒期間，不宜進(jìn)入消毒空間(我們公司現(xiàn)在是用臭氧)。消毒后通風(fēng)換氣，等氣味散盡后再出入。使用前用20%新潔爾滅（苯扎溴銨溶液）對(duì)接種室內(nèi)墻壁、地板及設(shè)備擦洗，用75%酒精噴霧（使灰塵迅速沉降），用紫外線滅菌20分鐘或更長(zhǎng)，照射期間注意接種室的門要關(guān)嚴(yán)。當(dāng)接種室在用紫外線消毒期間，工作人員不要處在正消毒的空間內(nèi)，更不要用眼睛注視紫外燈，也要避免手長(zhǎng)時(shí)間在開著紫外燈的超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行操作。一般在接種室用紫外線消毒后，不要立即進(jìn)入接種室，此時(shí)室內(nèi)充滿高濃度的臭氧，會(huì)對(duì)人體，尤其是呼吸系統(tǒng)造成傷害。應(yīng)在關(guān)閉紫外線燈15~20分鐘后再進(jìn)入室內(nèi)。 二、工作人員的無菌技術(shù) 工作人員要經(jīng)常洗頭、洗澡、剪指甲，保持個(gè)人清潔衛(wèi)生。在接種室穿醫(yī)護(hù)用的特制工作衣帽。工作衣、帽、口罩也要經(jīng)常清洗，洗凈晾干后用紙包好進(jìn)行高溫高壓消毒。工作衣使用前后掛于預(yù)備間，并用紫外線照射滅菌。接種前洗手，最好用肥皂水或新潔爾滅清洗，然后用75%酒精擦洗或噴灑。 三、接種器械無菌技術(shù) 接種時(shí)首先要用紫外線照射超凈工作臺(tái)面后，用75%酒精噴霧或擦洗工作臺(tái)面。工作前送風(fēng)15~30分鐘左右。首先對(duì)器械支架進(jìn)行灼燒消毒，然后對(duì)接種工具如手術(shù)剪、手術(shù)刀、鑷子等進(jìn)行灼燒消毒，方法一般是用75%酒精浸漬、擦拭或噴灑后在酒精燈上灼燒。接種工具灼燒后放在器械支架上冷卻待用。接種一定數(shù)量材料后，接種器械要重新灼燒滅菌，避免因沾有植物材料或瓊脂等引起雙重污染和交叉污染。通常采用兩套接種工具，使用一套時(shí)，另一套灼燒后冷卻。對(duì)于較大的器械如顯微鏡等，可用75%酒精擦洗表面，然后用紫外線照射滅菌。繼代轉(zhuǎn)接時(shí)，要注意對(duì)待轉(zhuǎn)接的培養(yǎng)物進(jìn)行仔細(xì)觀察挑選，防止將已經(jīng)污染的培養(yǎng)物繼代擴(kuò)增；放置了很久的試管或三角瓶表面和瓶塞宜用75%酒精綿擦洗。接種器械灼燒時(shí)應(yīng)遠(yuǎn)離裝酒精的容器，更不能剛剛燒完就插入裝酒精的容器中，也要避免不小心將酒精容器或酒精燈碰倒后引起失火。另外，在酒精燈點(diǎn)燃后，不宜用酒精溶液噴灑超凈工作臺(tái)。 四、接種操作無菌技術(shù) 接種時(shí)，要穿好工作衣，戴好工作帽和口罩，不準(zhǔn)說話或?qū)χ参锊牧匣蚺囵B(yǎng)容器口呼吸。打開包塞紙和瓶塞時(shí)注意不要污染瓶口。在近酒精燈火焰處打開培養(yǎng)瓶瓶口，并使培養(yǎng)瓶?jī)A斜，以免微生物落入瓶?jī)?nèi)。瓶口可以在拔塞后或蓋前灼燒滅菌，接種工作宜在近火焰處進(jìn)行。手不能接觸接種器械的前半部分（即直接切割植物材料的部分），接種操作時(shí)（包括擰開或擰上培養(yǎng)瓶蓋時(shí)），培養(yǎng)瓶、試管或三角瓶宜水平放置或傾斜一定角度（45°以下），避免直立放置而增大污染機(jī)會(huì)（圖1）。手和手臂應(yīng)避免在培養(yǎng)基植物材料、接種器械上方經(jīng)過。已消毒的植物材料接種時(shí)不慎掉在超凈工作臺(tái)上，不宜再用。接種期間如遇停電等事件使工超凈工作臺(tái)停止運(yùn)轉(zhuǎn)，重新啟動(dòng)時(shí)應(yīng)對(duì)接種器械及暴露的植物材料重新消毒。 切割外植體時(shí)，可在預(yù)先經(jīng)消毒（高溫高壓消毒、干熱消毒或?yàn)⒕潦煤笞茻郎缇┖蟮呐囵B(yǎng)皿、盤、碟、玻璃板、濾紙、牛皮紙或紙箱皮等上進(jìn)行。如果需要將組織切割成大小或重量均勻的小片（塊）時(shí)，可以使用塑料包裹或玻璃覆蓋的繪圖紙、軟木打孔器、以及在鋁箔紙上利用天平無菌稱量等。在解剖莖尖或分生組織時(shí)，動(dòng)作要快而準(zhǔn)確，避免材料損傷過多或在空氣中暴露過久而褐化或干死。 |
22樓2012-07-05 08:28:54
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