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ffrc金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于DNA提取的問題。請(qǐng)高手賜教 已有9人參與
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請(qǐng)高手賜教以下問題。 我提DNA過程中，先后用裂解液、飽和酚、酚仿醇（25:24:1）、氯仿、酒精、75%酒精。最后用TE溶解。 此過程沒有用RNase。 這個(gè)過程提取下來的DNA有RNA干擾，有蛋白殘留。 請(qǐng)問如何將這個(gè)粗提的DNA純化。 在哪里加RNase,加多少，如何一步步純化。 請(qǐng)細(xì)告知。謝謝 |
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rosalie161
金蟲 (正式寫手)
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提取詳細(xì)
★
ffrc(金幣+1):謝謝參與
ffrc(金幣+10):非常詳細(xì)。巨謝 2010-08-05 10:11:49
ffrc(金幣+1):謝謝參與
ffrc(金幣+10):非常詳細(xì)。巨謝 2010-08-05 10:11:49
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（2） 將100ml培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，12000rpm離心5min，棄上清。 （3） 加入9.5mlTE懸浮沉淀，并加0.5ml10%SDS，50μl20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶K。混勻37℃保溫1小時(shí)。 （4） 加1.5ml5mol/LNaCl，混勻。 （5） 加1.5mCTAB/NaCl溶液，混勻，65℃保溫20分鐘。 （6） 用等體積酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）抽提，12000rpm離心10分鐘，將上清液移至干凈離心管。 （7） 用等體積異戊醇：氯仿（1：24）抽提，12000rmp離心10分鐘，取上清液移至干凈管中。 （8） 加入0.6-1倍體積異丙醇，-20℃靜置30min. （9） 12000rpm離心10min棄上清。 （10）將沉淀懸浮于10ml超純水中。 （11）加入RNase,37℃水浴30min. （12）加入等體積飽和酚/氯仿/異戊醇（25：24：1），上下顛倒數(shù)次混勻。 （13）12000rpm離心10min,吸取上相液體。 （14）加入等體積飽和氯仿/異戊醇（24：1），上下顛倒數(shù)次混勻。 （15）12000rpm離心10min,吸取上相液體。 （16）加入1/10體積3M NaAc，在加入2倍體積預(yù)冷的無水乙醇，-20℃放置30min. （17）12000rpm離心15min,棄上清，用70%的乙醇洗滌沉淀。 （18）自然風(fēng)干后，加入1-2mlTE或者超純水溶解DNA。 （19）紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD235,OD260和OD280，以判定提取的基因組DNA的純度和濃度。 |
9樓2010-08-05 09:12:37
2樓2010-08-04 22:25:00
hustxiong
木蟲 (正式寫手)
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3樓2010-08-04 22:38:43
accident1256
銅蟲 (小有名氣)
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4樓2010-08-04 22:45:21
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