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darwinxie鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
自強(qiáng)瓜族族長(zhǎng)-----呆瓜大叔
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[交流]
【求助/交流】如何高度純化蛋白，急急急 已有7人參與
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| 我是用strep-tag，純化蛋白后跑sds-page，總是有很多扎帶，如何能高度純化蛋白呢，就只得到目的條帶 |
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冼亮淀粉酶
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):淀粉酶，很熱心~ 2010-08-11 18:03:37
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):淀粉酶，很熱心~ 2010-08-11 18:03:37
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有標(biāo)簽，親和層析還有很多雜帶就少見(jiàn)了。建議考慮下?lián)Q標(biāo)簽，例如his-tag。 不建議像2樓說(shuō)的用SDS-PAGE來(lái)做蛋白質(zhì)回收，用SDS FREE的，不用做復(fù)性了，復(fù)性不是每個(gè)蛋白質(zhì)都容易做得出來(lái)的。如果你的蛋白質(zhì)表現(xiàn)出來(lái)的活性易于鑒別的的，可以考慮切膠洗脫。 3樓說(shuō)的分子篩，如果是預(yù)裝柱，上樣量一般推薦為柱床體積的1%，這樣要獲得足夠蛋白質(zhì)就必須要極濃的蛋白質(zhì)。而且過(guò)柱時(shí)流速推薦不大于1毫升每分鐘，加上平衡和完事后洗柱保存，時(shí)間投入極大。不如先試一下離子交換，低鹽上樣高鹽洗脫的，鹽離子不高的話，很多蛋白質(zhì)都沒(méi)事，而且流速可高達(dá)5毫升每分鐘。如果高鹽也可耐受，還可以做疏水層析。 如果不行，就換標(biāo)簽his吧，省事。 |
4樓2010-08-11 14:38:52
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7樓2010-08-11 16:40:25
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14樓2010-08-12 15:30:59
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16樓2013-10-24 19:14:18
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