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lantian8210銀蟲 (初入文壇)
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[交流]
FRAP體外抗氧化實驗
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| 請問，做FRAP法測定中藥體外抗氧化實驗時，TPTZ用大濃度的鹽酸配置（1mol/l)會有什么樣的影響？我測時它的最大吸收波長已經(jīng)是619了，而大部分文獻(xiàn)說是593, 還有，樣品的量和TPTZ（混合好的）工作液的比例一定是1:30嗎？有懂化學(xué)的，幫忙解釋一下吧，謝謝 |
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lantian8210(金幣+10, 博學(xué)EPI+1): 2010-08-21 07:55:59
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這個很難，請參考： 總抗氧化能力檢測試劑盒(FRAP法)，即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，簡稱T-AOC Assay Kit，是一種采用Ferric Reducing Ability of Plasma(FRAP)方法，可以對血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液、或各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力進(jìn)行檢測的試劑盒。 活性氧(Reactive oxygen species,ROS)主要包括羥基自由基、超氧自由基和過氧化氫。在細(xì)胞或組織的正常生理代謝過程中會產(chǎn)生活性氧，同時一些環(huán)境因子例如紫外照射、γ射線照射、吸煙、環(huán)境污染等也可以誘導(dǎo)活性氧的產(chǎn)生。活性氧產(chǎn)生后，可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂、蛋白和DNA等的氧化損傷，誘發(fā)氧化應(yīng)激(Oxidative stress)，繼而導(dǎo)致各種腫瘤、動脈粥樣硬化、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、肝損傷、以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等。 機(jī)體中存在多種抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除體內(nèi)產(chǎn)生的各種活性氧，以阻止活性氧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激(oxidative stress)的產(chǎn)生。一個體系內(nèi)的各種抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的總的水平即體現(xiàn)了該體系內(nèi)的總抗氧化能力。因此測定血漿、血清、尿液、唾液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液中的總抗氧化能力具有非常重要的生物學(xué)意義。 植物或中草藥抽提液、或各種抗氧化物溶液的總抗氧化能力的檢測可以用于檢測各種溶液的抗氧化能力的強(qiáng)弱，可以用于篩選強(qiáng)抗氧化能力的藥物。 FRAP法測定總抗氧化能力的原理是酸性條件下抗氧化物可以還原Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的Fe2+-TPTZ，隨后在593nm測定藍(lán)色的Fe2+-TPTZ即可獲得樣品中的總抗氧化能力。由于反應(yīng)在酸性條件下進(jìn)行，可以抑制內(nèi)源性的一些干擾因素。并且由于血漿等樣品中的鐵離子或亞鐵離子的總濃度通常低于10μM，因此血漿等樣品中的鐵離子或亞鐵離子不會顯著干擾FRAP法的檢測反應(yīng)。由于反應(yīng)體系中的鐵離子或亞鐵離子是和TPTZ螯合的，樣品本身含有的少量金屬離子螯合劑通常也不會顯著影響檢測反應(yīng)。 Antioxidant Fe3+-TPTZ ——————> Fe2+-TPTZ (藍(lán)色) 提供了抗氧化物Trolox作為對照。Trolox是一種維生素E的類似物，水溶性較好，抗氧化能力和維生素E相近。 本試劑盒方便快捷，加入待測樣品后3-5分鐘即可進(jìn)行吸光度測定，通常10-20個樣品可以在十多分鐘內(nèi)檢測完畢。 本試劑盒可以檢測100個樣品。 包裝清單： 產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝 S0116-1 TPTZ稀釋液 15ml S0116-2 TPTZ溶液 1.5ml S0116-3 檢測緩沖液 1.5ml S0116-4 FeSO4溶液 (10mM) 0.5ml S0116-5 Trolox溶液 (10mM) 0.1ml — 說明書 1份 保存條件： -20℃保存，一年有效。其中S0116-2 TPTZ溶液，S0116-3 檢測緩沖液和S0116-5 Trolox溶液(10mM)需避光保存。 注意事項： 在酸性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾，需盡量避免。 如果樣品中含有外加的較高濃度的鐵鹽或亞鐵鹽，會干擾測定。但血漿、血清、細(xì)胞或組織裂解液等樣品中含有的微量的鐵鹽或亞鐵鹽不會干擾測定。 樣品中不能添加DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的物質(zhì)，也不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢劑。 測定時需可以測定A593的酶標(biāo)儀一臺(測585-605nm也可以)或可以測定微量樣品的分光光度計一臺。 TPTZ對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 |
2樓2010-08-19 10:12:02
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3樓2012-07-09 12:29:16
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