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whynotbest至尊木蟲 (職業(yè)作家)
淫蟲
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[交流]
【求助】100金幣求助各位一個HPLC的具體問題。
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情況是這樣的：小弟在用HPLC研究一個反應(yīng)的方法學，看看各種不同的條件下哪個產(chǎn)率高。所以對不同反應(yīng)條件下的反應(yīng)液進行了HPLC檢測。之前，先對標準品進行了條件摸索，最后用甲醇：水=65:35，峰形還可以。 但是在對不同的反應(yīng)液進行檢測時出現(xiàn)一點問題。在其中幾種反應(yīng)條件下，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)液的目標峰形竟然呈現(xiàn)雙峰，如下圖：  最高的那個峰是目標峰。在用標準品進樣時，可以確定是一個單峰。而且在其他某些反應(yīng)條件下，反應(yīng)液也是一個單峰。如下圖：  大家可以看到，對于某幾組反應(yīng)液，是很好的一個單峰。但是在某幾組反應(yīng)液進樣時，就變成上述的雙峰。 我的幾個疑惑是： 1. 紫外吸收值很小，進樣量也就30μL，應(yīng)該不是超載吧。并且標準品都是單峰，吸收值比這個高得多，反應(yīng)液沒理由超載的。 2. 也不大可能是生成了其他與目標產(chǎn)物挨得很近的峰，因為我摸方法學的這個條件，只涉及到產(chǎn)率高低，不會因為條件不同生成其他東西的。 所以想問一下各位蟲友，這樣的情況怎么解釋和處理呢？ [ Last edited by whynotbest on 2010-8-27 at 00:46 ] |
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