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【分享】石蠟切片法 已有4人參與
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顧名思義，石蠟切片法是用石蠟作為包埋劑的一種顯微制片方法，是顯微技術(shù)中最重要最常用的方法之一。它的優(yōu)點是能夠切出薄而均勻的連續(xù)切片，便于進行器官的三維重構(gòu)。此法多用手搖切片機切片。對于較硬的材料，也可以使用滑走切片機。 石蠟切片法的操作程序包括：取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、修塊、切片、粘片、染色和封片。 (1)取材：選取生長良好、有代表性的目標材料，洗凈。用鋒利的雙面刀片截取材料，動作要迅速。材料的大小不超過0.5~lcm3。 (2)固定：將選取的材料放人固定液中，固定液的體積大約是材料的20倍。固定是用化學(xué)試劑迅速殺死細胞的過程。目的是盡可能使細胞中的各個組分保持生活狀態(tài)的結(jié)構(gòu)，并固定在它們原來的位置上。常用的固定劑有FAA、卡諾和納瓦興固定液。前兩種固定液的固定時間是2~24h，后者是12~48h。FAA既是良好的固定劑，也是保存劑，材料可以在其中長久保存。而卡諾固定液和納瓦興固定液則不能長久保留材料，固定后，應(yīng)盡快清洗，轉(zhuǎn)人70%酒精中保存。若材料含有空氣，固定時需要抽氣。 (3)脫水：固定好的材料經(jīng)各級酒精脫水至純酒精。各級酒精的濃度為：30%、50%、70%、85%、95%和l0O%。 (4)透明：純酒精中的植物材料用l／2純酒精和l／2二甲苯混合液處理2~3h，轉(zhuǎn)入純二甲苯中，處理兩次。由于石蠟溶于二甲苯而不溶于酒精，因此透明的作用除了使材料變得透明外，另一方面是將材料中的酒精除去。 (5)浸蠟：使石蠟慢慢溶于透明劑中，然后完全取代透明劑進人植物組織中。一般將透明好的材料換入新的二甲苯中，然后加入等體積的碎蠟，置于40℃左右的溫箱中。隨著碎蠟的溶解，不斷加入碎蠟使石蠟飽和為止。時間大約l~2天。 (6)包埋：浸蠟后，在60℃的溫箱中，換兩次已溶解的純蠟，每次約2h。然后將材料和石蠟一起倒人小紙盒中，用加熱的鑷子迅速把材料按需要的切面和一定的間隔排列整齊，再將小紙盒平放于冷水中，使其很快凝固。 (7)修塊：將包埋好的材料切割成小塊，每個小塊包含一個材料。然后按需要的切面將蠟塊切成梯形，切面在梯形的上部，注意上部矩形的對邊平行。梯形的底部用燒熱的蠟鏟將其固定在木塊上。 (8)切片：用手搖切片機將蠟塊切成連續(xù)的蠟帶。切片時，把切片刀夾在刀架上，再把木塊夾在固定裝置上，調(diào)整固著位置，使材料的切與面刀口平行。然后調(diào)整厚度，轉(zhuǎn)動切片機切片。 (9)粘片：粘片是將切好的蠟片粘在載玻片上。在潔凈的載玻片上，加少許粘貼劑并涂勻。然后加幾滴3%福爾馬林或蒸餾水，用解剖針或鑷子輕輕將蠟片放在液面上。再將帶有蠟片的載玻片放在溫臺上，溫臺的溫度在45℃左右，蠟片受熱后慢慢伸直。用濾紙吸去多余液體，表面烤干后，轉(zhuǎn)入30℃溫箱放置一晝夜。 (10)染色和封片：切片干燥后，可以選用不同的染色法染色。染色前先要進行脫蠟，使材料內(nèi)外的石蠟溶解。然后根據(jù)配制染液的溶液情況，決定是否需要復(fù)水。下面以植物生物學(xué)中最常見的番紅-固綠染色方法，說明染色與制片過程。 |
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2樓2010-09-02 13:18:59
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3樓2013-11-18 16:36:59
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4樓2014-06-04 09:22:13
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好 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
5樓2014-09-12 19:50:03
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