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[交流]
【求助/交流】芽孢桿菌屬的基因敲除方法 已有1人參與
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大腸桿菌的基因敲除方法已經(jīng)很成熟，例如RED重組系統(tǒng)。現(xiàn)在正準(zhǔn)備做芽孢桿菌屬的基因敲除，礙于學(xué)識(shí)有限，大家能夠提出一些意見(jiàn)及注意事項(xiàng)嗎？ 包括敲除系統(tǒng)； 敲除使用的方法； 常見(jiàn)使用的質(zhì)粒等載體。 國(guó)內(nèi)外成功的案例，只要是指工業(yè)生產(chǎn)菌的敲除。 歡迎討論，謝謝。 |
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hkfgwww(金幣+2):非常感謝 2010-10-23 10:08:20
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芽胞桿菌轉(zhuǎn)化都很困難別說(shuō)敲除了，主要是因?yàn)樽陨淼男揎椣到y(tǒng)會(huì)對(duì)外源質(zhì)粒進(jìn)行降解。我實(shí)驗(yàn)進(jìn)展到目前，只構(gòu)建了2株穿梭表達(dá)工程菌。我?guī)熃阌杏霉爬系膕pizizen方法整合成功過(guò)，我沒(méi)成功過(guò)，就是利用芽胞桿菌對(duì)數(shù)期自身的感受性來(lái)轉(zhuǎn)化。 我現(xiàn)在用的轉(zhuǎn)化是澳大利亞的經(jīng)典轉(zhuǎn)化方法，Gang-Ping Xue，Journal of Microbiological Methods 34 (1999) 183–191。效率很好。 另外德國(guó)一個(gè)研究所連續(xù)發(fā)了3篇文章都是關(guān)于芽胞桿菌轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)化后研究的文章，你可以看看。Appl Microbiol Biotechnol (2008) 78:181–188，Bianca Waschkau，這是其中一篇 |
10樓2010-10-22 19:23:09
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