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gdongli8325鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】構(gòu)建超表達(dá)載體時引物的設(shè)計
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| 因為之前所用的試劑盒的原因，設(shè)計引物時需要在引物前多加四個堿基，現(xiàn)在要另換試劑盒，不知道這四個多出的堿基是否會造成閱讀框位移？ 此外，想了解一個最基本的問題：在5，UTR設(shè)計引物構(gòu)建超表達(dá)載體時，是不是從引物開始到ATG必須是3的倍數(shù)，這樣才不會造成閱讀框位移？我的觀點是，因為DNA先要轉(zhuǎn)錄成RNA，然后才翻譯成蛋白，所以即使不是三的倍數(shù)，也不會造成位移。 希望了解的同學(xué)給予答復(fù)。 |
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yujiaping1
木蟲 (著名寫手)
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silicare(金幣+1):謝謝參與 2010-09-13 12:15:40
gdongli8325(金幣+5): 2010-09-13 16:27:12
silicare(金幣+1):謝謝參與 2010-09-13 12:15:40
gdongli8325(金幣+5): 2010-09-13 16:27:12
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換了試劑盒，換了載體嗎？如果換了載體就要比對一下新的載體的序列 構(gòu)建表達(dá)載體，樓主使用的是待表達(dá)基因的ATG還是載體的ATG，如果是載體的，就要注意載體ATG和表達(dá)基因的ATG之間的序列要是3的倍數(shù)，如果不是要用引物來調(diào)整，如果是使用自己的ATG，那就不用考慮了。這跟先轉(zhuǎn)錄后翻譯沒有關(guān)系，因為轉(zhuǎn)錄的片段比載體的表達(dá)閱讀框要長，翻譯還是從第一個ATG開始的 |
2樓2010-09-12 22:25:01
biotech113
銅蟲 (初入文壇)
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3樓2010-09-13 11:19:46
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